Вопросы медицинской химии (ISSN 0042-8809)

Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli

   


1. Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН
2. Центр Молекулярной Медицины Макса-Дельбрюка, Берлин, Германия
Идентификатор PubMed: 11558314
Год: 2001 том: 47  выпуск:3  страницы: 315-328
Реферат: Для получения водорастворимой формы микросомального цитохрома Р450 2В4 были созданы с помощью генетической инженерии несколько вариантов химерных белков с глутатион-S-трансферазой. В N-концевой район Р450 2В4, лишенный сигнального якорного участка (2-27), были введены специфические аминокислотные последовательности (в позиции 46-49), узнаваемые протеолитическими ферментами (фактор Ха и тромбин). Предполагалось, что ограниченный протеолиз в данном районе даст возможность получить белок, лишенный гидрофобной N-концевой области (1-49). Однако, результаты показали, что выбранный район в Р450 2В4 обладает устойчивостью к действию специфических протеиназ. Положительный результат был получен при проведении ограниченного протеолиза с IgAэндопротеиназой, узнающей нативную последовательность PPGP (31-34) в Р450 2В4. Таким образом, впервые была получена укороченная форма цитохрома 2В4, лишенная 33 N-концевых аминокислотных остатка. Обнаружено, что экспрессия генетически созданных вариантов ГSТ-Р450 2В4 в Escherichia coli сопровождается образованием прочного комплекса с молекулярными клеточными шаперонами GroEL и DnaK. Установлено, что диссоциация комплекса происходит после ограниченного протеолиза: в линкерной последовательности (позиция 6-7), соединяющей С-концевой район ГST домена и N-концевой район Р450 2В4, а также перед N-концевым метионином 2В4 и в позиции 33-34 (2В4). Полученные результаты дают основание предполагать, что взаимодействие с молекулярными шаперонами GroEL/DnaK, вероятно, является необходимым условием для фолдинга эукариотического цитохрома 2В4 в процессе его биосинтеза в E.coli.
Загрузить PDF:
Ссылка: Прозоровский Т.В., Шунк В.Х., Арчаков А.И., Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli, Вопросы медицинской химии, 2001, том: 47(3), 315-328.
Список литературы
 2002(Том:48)
 2001(Том:47)
 2000(Том:46)
 1999(Том:45)
 1998(Том:44)
 1997(Том:43)
 1996(Том:42)