Вопросы медицинской химии (ISSN 0042-8809)

Гетерологичная экспрессия эукариотических CYP450 1. Uетерологичная экспрессия цитохрома P450 2B4 с различными концевыми аффинными группами в штаммах E.coli

   


1. Центр “Биоинженерия” РАН
2. Институт биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН
Идентификатор PubMed: 11693026
Год: 2001 том: 47  выпуск:4  страницы: 382-392
Реферат: Проведен сравнительный анализ уровня экспрессии вариантов цитохрома печени кролика P450 2B4 c N- и С-концевыми модификациями; исследованы некоторые энзиматические характеристики рекомбинантных белков. Сконструированы C-концевые гибриды для гена CYP450 2B4 с последовательностями ДНК: 1) для белковой кассеты интеин - хитин связывающий домен и 2) олигопептида гексагистидина. Данные модификации сочетались с N-концевым гибридом гена 2B4 с нуклеотидной последовательностью белка глутатион-S-трансферазы [Pernecky S.J.,et.al., (1995) Arch. Biochem. Biophys., 318, 446-456]. Полученные конструкции обеспечивали синтез полноразмерных белковых продуктов в штаммах E.coli с выходом спектрально-активного белка на уровне 200 – 1000 нмоль/л культуры. В случае С-концевых гибридов с белком интеином наблюдался частичный автопротеолиз, несмотря на вставку аминокислоты глицина на стыке двух белков. Показана принципиальная невозможность применения стандартной схемы очистки для продукта экспрессии с C-концевой интеиновой аффинной группой для CYP450 2В4. Дитиотреитол (40 мМ), воздействующий на гибридный белок, инактивирует цитохромный домен. Полноразмерная форма цитохрома 2В4 с С-концевой олигогистидиновой последовательностью под контролем T7 промотора была экспрессирована и выделена из клеток E.coli с помощью аффинной хроматографии. Концевая модификация гексагистидином не влияет на каталитические свойства белка в реакции О-деалкилирования 7-пентоксирезоруфина
Загрузить PDF:
Ссылка: Жгун А.А., Эльдаров М.А., Солодарь Л.И., Соколов Н.Н., Арчаков А.И., Скрябин К.Г., Гетерологичная экспрессия эукариотических CYP450 1. Uетерологичная экспрессия цитохрома P450 2B4 с различными концевыми аффинными группами в штаммах E.coli, Вопросы медицинской химии, 2001, том: 47(4), 382-392.
Список литературы
 2002(Том:48)
 2001(Том:47)
 2000(Том:46)
 1999(Том:45)
 1998(Том:44)
 1997(Том:43)
 1996(Том:42)