Стабильная трансфекция клеток daoy антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов

   


1. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии Программа по молекулярной и клеточной онкологии, Институт биомедицинских наук, Университет Джорджа Вашингтона
2. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии корпорация Human Genome Sciences
Тип: Экспериментальное/клиническое исследование
УДК: 577.155+577.151.042+575.224.46      Идентификатор PubMed: 16898583
Год: 2006 том: 52  выпуск:3  страницы: 245-257
Реферат: Клеточные ганглиозиды участвуют во взаимодействиях между раковой опухолью и иммунной системой пациента. Для исследования их роли в формировании опухоли и ангиогенезе, мы разработали модель, основанную на антисмысловом ингибировании GM3-синтазы, одного из базовых ферментов в биосинтезе ганглиозидов. Получен ряд трансфицированных клонов клеточной линии DAOY (медуллобластомы человека), из которых выделены несколько клонов, которые стабильно экспрессировали 560-нуклеотидный фрагмент кДНК GM3-синтазы в смысловой или антисмысловой ориентации, а также клонов, трасфицированных пустым вектором. Все клеточные клоны перманентно интегрировали экспрессионные вектора в свою геномную ДНК. Полученные клоны были проанализированы на содержание ганглиозидов при помощи экстракции клеточных липидов, выделения ганглиозидов и применения высоко эффективной тонкослойной хроматографии. У одного из антисмысловых клонов, названного 7.2А, уровень ганглиозидов был снижен на 70%. Во всех контрольных клонах (трансфицированных смысловым и "пустым" векторами) содержание ганглиозидов не отличалось от нетрансфицированных клеток DAOY. Тем не менее, после 10-ти пассажей в культуре, уровень ганглиозидов у клона 7.2А возвращался к норме, несмотря на неизменно высокий уровень экспрессии антисмысловой мРНК. Следовательно, трансфекция клеток антисмысловой РНК может иногда вызывать только временное ингибирование экспрессии продукта-мишени.
Загрузить PDF:
Ссылка: Шевчук Н.А., Манила Дж., Нусинович Е.А., Ладиш С., Стабильная трансфекция клеток daoy антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов, Биомедицинская химия, 2006, том: 52(3), 245-257.
Список цитируемой литературы (Bibliography)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 2011(Том:57)
 2010(Том:56)
 2009(Том:55)
 2008(Том:54)
 2007(Том:53)
 2006(Том:52)
 2005(Том:51)
 2004(Том:50)
 2003(Том:49)