Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием

   


1. Научно-исследовательский институт гриппа Северо-Западного отделения РАМН
2. Department of Medicine, Harbor Hospital
Тип: Экспериментальное/клиническое исследование
DOI: 10.18097/PBMC20105606726      УДК: 577.112.3:543.544:616.36-002.14      Идентификатор PubMed: 21395075
Год: 2010 том: 56  выпуск:6  страницы: 726-738
Реферат: Описан простой и чувствительный метод определения общего гомоцистеина, общего цистеина, общего глутатиона (GSH+GSSG) и нейроактивных аминокислот (Asp, Glu, Tau, GABA) при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с предколоночной дериватизацией орто-фталевым альдегидом и флуориметрическим детектированием на длинах волн 360 и 470 нм для возбуждения и эмиссии, соответственно. Дериватизацию орто-фталевым альдегидом осуществляли в присутствии 2-меркаптоэтанола после S-карбоксиметилирования свободных сульфгидрильных групп йодоуксусной кислотой. Для определения аминотиолов, дисульфидные связи восстанавливали и связанные с белками тиолы высвобождали, добавляя дитиотрейтол к плазме. Преимущество этого метода заключается в возможности одновременного определения как гомоцистеина/цистеина/глутатиона, так и нейроактивных аминокислот в пробе. Уровни исследованных веществ были определены в плазме крови 14 здоровых волонтеров (20-45 лет) и 55 больных хроническим гепатитом C (20-49 лет). Полученные значения соответствовали ранее опубликованным данным об уровнях этих веществ в плазме. Калибровочные кривые были линейными в диапазоне концентраций 5-100 мкМ в плазме крови (r2=0,985-0,996). Коэффициент вариации, рассчитанный по повторным исследованиям пробы, произведенным в один день и в течение нескольких дней, составлял 3-6% и 4-7%, соответственно. Воспроизводимость определения стандартов, добавленных в плазму составляла 94-102%. Лимит детектирования составлял 0,2-0,5 нг в 10 мкл анализируемой пробы (соотношение сигнал/шум - 3).
Загрузить PDF:
Ссылка: Поздеев В.К., Поздеев Н.В., Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием, Биомедицинская химия, 2010, том: 56(6), 726-738.
Переводная версия в журнале
«Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:
10.1134/S199075081003011X
Список цитируемой литературы (Bibliography)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 2011(Том:57)
 2010(Том:56)
 2009(Том:55)
 2008(Том:54)
 2007(Том:53)
 2006(Том:52)
 2005(Том:51)
 2004(Том:50)
 2003(Том:49)