Рекомбинантная синтетаза цефалоспоринов-кислот: оптимизация экспрессии в клетках E. coli, иммобилизация и использование для биокаталитического синтеза цефазолина

   


1. Центр “Биоинженерия” РАН, Москва, Россия
2. Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва, Россия
3. Научно-производственный центр “Армбиотехнология” Национальной академии наук Армении, Армения
Тип: Краткое сообщение
DOI: 10.18097/PBMC20156105646      УДК: 577.151; 579.66      Идентификатор PubMed: 26539875
Год: 2015 том: 61  выпуск:5  страницы: 646-651
Реферат: Синтетаза цефалоспоринов-кислот (cephalosporin-acid synthetase, CASA) специфична к синтезу цефалоспоринов-кислот; продукция этого фермента в клетках Escherichia coli сопровождается накоплением непроцессированного нерастворимого предшественника. Для оптимизации условий продукции рекомбинантной CASA изучали эффекты таких параметров культивирования штамма-продуцента как состав питательной среды, посевная доза, температура культивирования. Для совершенствования вектора экспрессии CASA были созданы дополнительные конструкции для продукции варианта CASA с сигнальной последовательностью L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ansCASA) и “безлидерного” варианта CASA. Удаление N-концевой сигнальной последовательности на порядок снижало уровень продукции функционально активной CASA и подавляло рост штамма. Введение сигнальной последовательности L-аспарагиназы повышало удельную активность фермента в полученном штамме. С использованием продуцента ansCASA разработан метод иммобилизации рекомбинантного фермента на макропористом акрилатном носителе, содержащем активные эпоксигруппы. Полученный биокатализатор обеспечивал высокоэффективный синтеза цефазолина (ЦЕЗ) из 3-[(5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-тиометил]-7-аминоцефалоспорановой кислоты (ММТД-7-АЦК) и метилового эфира 1(H)-тетразолилуксусной кислоты (МЭТЗУК), в мягких условиях достигнута степень трансформации ММТД-7-АЦК в ЦЕЗ 95%.
Загрузить PDF:
Ссылка: Эльдаров М.А., Скляренко А.В., Думина М.В., Медведева Н.В., Жгун А.А., Сатарова Д.Э., Сидоренко А.И., Епремян А.С., Яроцкий С.В., Рекомбинантная синтетаза цефалоспоринов-кислот: оптимизация экспрессии в клетках E. coli, иммобилизация и использование для биокаталитического синтеза цефазолина, Биомедицинская химия, 2015, том: 61(5), 646-651.
Список цитируемой литературы (Bibliography)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 2011(Том:57)
 2010(Том:56)
 2009(Том:55)
 2008(Том:54)
 2007(Том:53)
 2006(Том:52)
 2005(Том:51)
 2004(Том:50)
 2003(Том:49)