Экзосомы слезной жидкости здоровых людей: выделение, идентификация и характеризация

   


1. Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия
2. Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия; Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
3. Новосибирский филиал “Межотраслевой научно-технический комплекс “Микрохирургия глаза” имени ак. С.Н. Федорова”, Новосибирск, Россия
Тип: Клинико-диагностическое исследование
DOI: 10.18097/PBMC20166201099      УДК: 617.764-07      Идентификатор PubMed: 26973197
Год: 2016 том: 62  выпуск:1  страницы: 99-106
Реферат: Экзосомы – тип внеклеточных везикул, являющихся переносчиками молекулярных сигналов в организме, а также несущих маркеры клеток-продуцентов. Целью данного исследования явилось выявление экзосом в слёзной жидкости (СЖ) здоровых людей, подтверждение их природы и изучение морфологических и молекулярно-биологических характеристик. Образцы СЖ однократно собирали у 24 здоровых доноров (45-60 лет), центрифугировали при 20000 g (15 мин) для осаждения клеточного дебриса. Супернатанты исследовали методом негативного контрастирования, а также использовали для выделения и очистки экзосом (ультрафильтрация через поры 100 нм, двойное ультрацентрифугирование (90 мин, 100000 g, 4°C). Полученные образцы исследовали методами электронной микроскопии и иммуноцитохимии, выделяли РНК и ДНК, определяли их размер капиллярным электрофорезом, определяли концентрацию и локализацию ДНК в экзосомах. Секвенирование ДНК проводили на секвенаторе MiSeq (Illumina), данные анализировали с помощью CLC GW 7.5 (CLC Bio). Последовательности картировали на геном человека (hg19). Супернатант СЖ содержал клеточный детрит, сферические микрочастицы (20-40 нм) и везикулы, часть которых по размеру и морфологии соответствовала экзосомам. Препараты, полученные из СЖ путём ультрацентрифугирования и ультрафильтрации, содержали микрочастицы (17%), сферические и чашеобразные везикулы (40-100 нм, 83%), на поверхности которых иммуноцитохимически были выявлены специфические для экзосом маркеры (CD63, CD9 и CD24). Проведённое исследование показало, что в СЖ людей содержатся экзосомы в высокой концентрации, с которыми связаны РНК (размером менее 200 пар нуклеотидов) и геномная ДНК (размером 3-9 т.п.о.). Секвенирование ДНК показало, что около 92% прочтений (reads) картируются на геном человека.
Загрузить PDF:
Ссылка: Григорьева А.Е., Тамкович С.Н., Еремина А.В., Тупикин А.Е., Кабилов М.Р., Черных В.В., Власов В.В., Лактионов П.П., Рябчикова Е.И., Экзосомы слезной жидкости здоровых людей: выделение, идентификация и характеризация, Биомедицинская химия, 2016, том: 62(1), 99-106.
Переводная версия в журнале
«Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:
10.1134/S1990750816020049
Список литературы
 2017(Том:63)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 2011(Том:57)
 2010(Том:56)
 2009(Том:55)
 2008(Том:54)
 2007(Том:53)
 2006(Том:52)
 2005(Том:51)
 2004(Том:50)
 2003(Том:49)