Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы

   


1. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия
2. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия; Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия
3. Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия; Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
4. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия; Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия
Тип: Экспериментальное исследование
DOI: 10.18097/PBMC20186402175     
Год: 2018 том: 64  выпуск:2  страницы: 175-182
Реферат: Проведено сравнительное исследование ферментативной и бактерицидной активности зрелой, димерной миелопероксидазы (МПО) и её мономерной формы. Димерную МПО выделяли из клеток линии HL-60. В качестве мономерной формы использовали геми-МПО, которую получали из димерной МПО восстановлением дисульфидной связи, соединяющей протомеры в димер. Оценивали оба вида ферментативной активности, свойственных МПО (пероксидазную и галогенирующую), каждую из которых измеряли двумя методами. Бактерицидную активность системы МПО/Н2О2/Cl- тестировали, используя лабораторный штамм Escherichia coli DH5a. Не было выявлено разницы в ферментативной и бактерицидной активности между димерной МПО и геми-МПО. Обе формы фермента не отличались между собой и по устойчивости к HOCl – основному продукту катализируемых МПО реакций. HOCl вызывала дозо-зависимое уменьшение пероксидазной и хлорирующей активности, и это уменьшение происходило одинаковым образом в образцах димерной МПО и геми-МПО. При концентрации димерной МПО и геми-МПО, уравненной по гему, отмечен несколько больший бактерицидный эффект в случае системы геми-МПО/Н2О2/Cl- по сравнению с системой димерная МПО/Н2О2/Cl-. Это, скорее всего, обусловлено увеличением вероятности контакта фермента с поверхностью бактерий благодаря тому, что при равной концентрации по гему количество молекул геми-МПО в два раза больше количества молекул димерной МПО. Методом Вестерн-блоттинга с использованием антител против МПО впервые показано, что HOCl вызывает расщепление димерной молекулы на мономерные субъединицы, по-видимому, в результате окисления дисульфидной связи между ними. Это позволяет предположить, что появление в крови МПО, соответствующей по массе мономеру, связано с повреждением димерной МПО активными формами галогенов, особенно при их избыточной продукции, создающей окислительный/галогенирующий стресс при воспалительных заболеваниях.
Загрузить PDF:
Ссылка: Вахрушева Т.В., Соколов А.В., Костевич В.А., Васильев В.Б., Панасенко О.М., Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы, Биомедицинская химия, 2018, том: 64(2), 175-182.
Список литературы
 2018(Том:64)
 2017(Том:63)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 В печати