Количественный протеомный анализ экзосом крови человека

   


1. Национальный Университет Чен-Кунг, Тайвань
2. Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, Москва, Россия
Тип: Экспериментальное исследование
DOI: 10.18097/PBMC20186406496      Идентификатор PubMed: 30632977
Год: 2018 том: 64  выпуск:6  страницы: 496-504
Реферат: Экзосомы – мембранные микровезикулы, выделяемые клетками в биологические жидкости. Мембрана экзосом защищает их содержимое от деградации и содержит маркеры продуцирующей их клетки. Экзосомы продуцируются практически всеми клетками организма, клетки опухолей секретируют их особенно сильно. Однако, при исследовании функций этих внеклеточных везикул и идентификации опухолевых белковых биомаркеров в их составе на начальном этапе возникает серьезная проблема выделения чистых, охарактеризованных препаратов экзосом. В данной работе проведен количественный протеомный анализ экзосом сыворотки крови человека, полученных при помощи дифференциального ультрацентрифугирования, ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы или осаждения экзосомальной фракции сыворотки с использованием коммерческого набора Exosome Isolation Kit (“Invitrogen from ThermoFisher Scientific Baltics”, UAB, Литва). Масс-спектрометрическими методами мониторинга выбранных реакций (SRM) и панорамного масс-спектрометрического анализа проведено определение белкового состава выделенных экзосом. Полученные препараты были охарактеризованы по содержанию основных маркеров (CD9, CD82, HSPA8, CD63). В образцах экзосом, выделенных из сыворотки здоровых добровольцев методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы, было определено содержание вышеуказанных маркеров, которое составило 32,85, 15,59, 6,07 фмоль на 1мкг белка препарата экзосом, соответственно. Остальные методы, включая коммерческий набор, не дали положительных результатов. Результаты этого исследования показывают, что метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы является наиболее оптимальным для выделения экзосом.
Загрузить PDF:
Дополнительные материалы:
Ссылка: Шушкова Н.А., Вавилов Н.Э., Новикова С.Е., Фарафонова Т.Е., Тихонова О.В., Лияо Пао-чи, Згода В.Г., Количественный протеомный анализ экзосом крови человека, Биомедицинская химия, 2018, том: 64(6), 496-504.
Список литературы
 2018(Том:64)
 2017(Том:63)
 2016(Том:62)
 2015(Том:61)
 2014(Том:60)
 2013(Том:59)
 2012(Том:58)
 В печати