Выделение и очистка рекомбинантного “усеченного” (d 2-27) цитохрома P450 2B4, экспрессированного в клетках e.coli в составе гибридного белка с глутатион-s-трансферазой
Описывается модификация метода Coon и Pernecky (Meth. Enzymol., 1996, 272, 25-34) получения очищенного препарата рекомбинантного “усеченного” (D 2-27) цитохрома Р450 2В4, экспрессированного в клетках E.coli в составе слитого белка с глутатион-S-трансферазой. Модификации метода касались условий реакции протеолиза химерного белка тромбином, удаления примесей этой протеазы из очищенных препаратов цитохрома путем колоночной хроматографии на оксиапатите, введения этапа получения сферопластов с использованием лизоцима, условий стабилизации фермента в процессе очистки и хранения. Препарат рекомбинантного цитохрома получен с выходом 20% и уд.содержанием цитохрома Р450 около 14,5 нмоль/мг белка. Метод перспективен для препаративного выделения высокоочищенных препаратов цитохрома Р450, необходимых для изучения структурно-функциональных взаимоотношений этого гемопротеина с белками-партнерами и исследования его структуры и механизма действия
Соколов Н.Н., Александрова С.С., Омельнюянюк Н.М., Кирсанова И.Д., Чупырина И.В., Солодарь Л.И., Арчаков А.И. (1999) Выделение и очистка рекомбинантного “усеченного” (d 2-27) цитохрома P450 2B4, экспрессированного в клетках e.coli в составе гибридного белка с глутатион-s-трансферазой. Вопросы медицинской химии, 45(1), 24-29.
Соколов Н.Н. и др. Выделение и очистка рекомбинантного “усеченного” (d 2-27) цитохрома P450 2B4, экспрессированного в клетках e.coli в составе гибридного белка с глутатион-s-трансферазой // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45. -N 1. - С. 24-29.
Соколов Н.Н. и др., "Выделение и очистка рекомбинантного “усеченного” (d 2-27) цитохрома P450 2B4, экспрессированного в клетках e.coli в составе гибридного белка с глутатион-s-трансферазой." Вопросы медицинской химии 45.1 (1999): 24-29.
Соколов, Н. Н., Александрова, С. С., Омельнюянюк, Н. М., Кирсанова, И. Д., Чупырина, И. В., Солодарь, Л. И., Арчаков, А. И. (1999). Выделение и очистка рекомбинантного “усеченного” (d 2-27) цитохрома P450 2B4, экспрессированного в клетках e.coli в составе гибридного белка с глутатион-s-трансферазой. Вопросы медицинской химии, 45(1), 24-29.
Список литературы
Archakov A., Bachmanova G. (1990) Cytochrome P450 and Active Oxygen London:Taylor & Francis. Scholar google search
Pernecky S.J., Larson J.R., Philpot R.M., Coon M.J. (1993). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90, 2651-2655. Scholar google search
Larson J.R., Coon M.J., Porter T.D. (1991). J. Biol. Chem. 266, 7321-7324. Scholar google search
Pernecky S.J., Coon M.J. (1996). Methods in Enzymology. 272, 25-34. Scholar google search
Lehnerer M., Schulze J., Petzold A., Bernhardt R., Hlavica P. (1995). Biochem. Biophys. Acta. 1245, 107-115. Scholar google search
Scheller U., Juretzek Т., Schunck W.-H. (1996). Methods in Enzymology. 272, 65-75. Scholar google search
Guengerich F.P., Martin M.V., Guo Z., Chun Y.-J. (1996). Methods in Enzymology. 272, 35-44. Scholar google search
A.A.Zhgoon, V.E.Sidorovoch, M.A.Eldarov, E.A.Apktalina, N.N.Sokolov, W.H.Schunck, A.I.Archakov and ICG.Skryabin,. (1998). 12* International Symposium on Microsomes and Drug Oxidation, Montpellier, France, abstract 131. Scholar google search
Sambrook J.F., Fritsch E.F., Maniatis T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York?. Scholar google search
