Для определения активности СОД чаще всего используют фотометрические методы, в которых генерация супероксидных радикалов осуществляется с помощью НАДФ'Н оксидазы, или в ходе аутоокисления ряда веществ, таких как, например, адреналин. К недостаткам этих методов относятся необходимость строгого соблюдения рН, температуры, относительно продолжительное время проведения эксперимента, сложность подготовки материала для измерения. Предложенный метод определения активности СОД свободен от указанных недостатков. Он основан на фотосенсибилизированной рибофлавином хемилюминесценции люцигенина (ФХЛ). При этом ультрафиолетовое облучение рибофлавина приводит к генерации супероксидных радикалов, реакция которых с люцигенином сопровождается угнетаемой СОД хемилюминесценцией. Измерения проводились на приборе Photochem® фирмы F.A.T. GmbH. Были подобраны минимальные концентрации компонентов системы при которых интенсивность ФХЛ уже мало зависела от концентрации и была достаточна для проведения измерений: рибофлавин - 25 мкМ, люцигенин - 3 мкМ, метионин - 250 мкМ. В этих условиях количество СОД, приводящее к 50% ингибированию сигнала ФХЛ было равно 10 ±0,3 нг (Sigma, USA). Антиоксиданты, содержащиеся в крови, влияли на интенсивность ФХЛ, исходя из критерия 5% искажения результатов, в следующих концентрациях: аскорбиновая кислота > 3,6 мкМ, мочевая кислота > 0,3 мкМ, глутатион > 4 мкМ. Принимая во внимание количество этих антиоксидантов в цельной крови и эритроцитах было рассчитано, что даже без отмывки эритроцитов их количество в пробе не оказывает влияния на результаты определения активности СОД. Было проведено сравнение предложенного метода с широко известным методом фирмы Calbiochem®. Количество СОД, приводящее к двукратному уменьшению ФХЛ в нашем методе и в методе Calbiochem® было равно 10 и 40 нг (Sigma, USA), а стандартное отклонение составляло 0,45% и 0,96% соответственно. Была измерена активность СОД у 107 здоровых доноров (76 мужчин и 31 женщина, 40 человек - курильщики, 67- некурящие). Среднее значение активности фермента было 15,1 ± 0,4нгСОД/1хЮ9 эритроцитов.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: супероксиддисмутаза, СОД, фотохемилюминесценция, хемилюминесценция, определение активности
Цитирование:
Магин Д.В., Левин Г., Попов И.Н. (1999) Простой метод измерения активности супероксиддисмутазы с помощью фотосенсибилизированной хемилюминесценции. Вопросы медицинской химии, 45(1), 70-79.
Магин Д.В. и др. Простой метод измерения активности супероксиддисмутазы с помощью фотосенсибилизированной хемилюминесценции // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45. -N 1. - С. 70-79.
Магин Д.В. и др., "Простой метод измерения активности супероксиддисмутазы с помощью фотосенсибилизированной хемилюминесценции." Вопросы медицинской химии 45.1 (1999): 70-79.
Магин, Д. В., Левин, Г., Попов, И. Н. (1999). Простой метод измерения активности супероксиддисмутазы с помощью фотосенсибилизированной хемилюминесценции. Вопросы медицинской химии, 45(1), 70-79.
Bolann B.J., Ulvik R.J. (1988) Abstract for SFRR Meeting, Paris. Scholar google search
Sugawara M., Kita Т., Lee ED., Takamatsu J., Hagen G.A., Kuma K., Medeiros- Neto G.A. (1988) J. Clin. Endocrinol. Metab. 67. 1156-1161. Scholar google search
Haseloff R.F., Ruder В., Ebert В., Rudolph В., Wischnewsky G.G. (1989) Wiss. Zeitschrift der Humboldt-Universitat zu Berlin, R. Med. 38. 38-41. Scholar google search
Grunow M., Schopp W. (1989) Biomed. Biochim. Acta 40. 185-199. Scholar google search
