Сообщается о разработке системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота (iNOS) из макрофагов мыши в клетках E.coli. Для этого рамку трансляции iNOS клонировали в экспрессионный вектор pCWori+. Поскольку для биосинтеза активной iNOS необходима коэкспрессия кальмодулина (СаМ), то для получения функциональной экспрессии этого белка была проведена амплификация соответствующего участка библиотеки тотальной кДНК лягушки Xenopus Laevis, после чего сконструированы плазмиды для коэкспрессии кальмодулина под контролем tac и T7 промоторов. Рекомбинантная iNOS была функционально активна, о чем свидетельствуют результаты анализа CO-восстановленных спектров, детекция образования NO с помощью реакции превращения HbO2 в metHb, а также идентификация молекулы NO методом ЭПР. Выход рекомбинантной iNOS при использовании различных конструкций составил от 10 до 22 мг/л культуральной среды, а удельная активность от 0,42 до 0,64 U/мг белка. Эти цифры совпадают с ранее опубликованными данными других авторов. Установлено, что экспрессированная нами iNOS связана с мембранной фракцией клеток, при этом в супернатанте активность фермента не обнаружена. Данные о мембранной локализации iNOS не укладываются в сложившееся представление о том, что этот фермент является растворимым
Гервазиев Ю.В., Эльдаров М.А., Шкундина И.С., Александрова С.С., Воеводская Н.В., Соколов Н.Н. (1999) Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli. Вопросы медицинской химии, 45(5), 416-429.
Гервазиев Ю.В. и др. Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45. -N 5. - С. 416-429.
Гервазиев Ю.В. и др., "Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli." Вопросы медицинской химии 45.5 (1999): 416-429.
Гервазиев, Ю. В., Эльдаров, М. А., Шкундина, И. С., Александрова, С. С., Воеводская, Н. В., Соколов, Н. Н. (1999). Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli. Вопросы медицинской химии, 45(5), 416-429.
Chen P.F., Tsai A.L, Berka V., Wu K.K. (1996). J. Biol. Chem. 271, 14631-14635. Scholar google search
Gachhui R, Presta A., Bentley D.F., Abu-Soud H.M., McArthur R., Brudvig G, Ghosh D.K., Stuehr D.J. (1996). J. Biol. Chem. 271, 20594-20602. Scholar google search
Vorherr Т., Knopfel L, Hofmann F, Mollner S, Pfeuffer Т., Carafoli E. (1993). Biochemistry. 32, 6081-6088. Scholar google search
Persechini A., White H.D., Gansz K.J. (1996). J. Biol. Chem. 271, 62-67. Scholar google search
Anagli J., Hofmann F, Quadroni M, Vorherr Т., Carafoli E. (1995). Eur. J. Biochem. 233, 701-708. Scholar google search
Zoche M, Bienert M., Beyermann M., Koch K. W. (1996). Biochemistry. 35, 8742-8747. Scholar google search
Xie Q. W., Cho H., Kashiwabara Y.,BaumM., Weidner J. R., Ellis ton K., Mumford R., Nathan С (1994). J. Biol. Chem. 269, 28500-28505. Scholar google search
Geller D.A., Lowenstein C.J., Shapiro R.A., Nussler A.K., Di Silvio M., Wang S.C., Nakayama D.K., Simmons R.L., Snyder S.H., Billiar T.R. (1993). Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3491-3495. Scholar google search
Adachi H., Iida S., Oguchi S., Ohshima H., Suzuki H., Nagasaki K., Kawasaki H., Sugimura Т., Esumi H. (1993). Eur. J. Biochem. 217, 37-43. Scholar google search
Lee СМ., Robinson L.J., Michel T. (1995). J. Biol. Chem. 270, 27403-27406. Scholar google search
Charles I.G., Chubb A., Gill R., Clare J., Lowe P.N., Holmes L.S., Page M, Keeling J.G., Moncada S., Riveros-Moreno V. (1993). Biochem. Biophys. Res. Commun. 196, 1481-1489. Scholar google search
Sari M.A., Booker S., Jaouen M., Vadon S., Boucher J.I, Pompon D., Mansuy D. (1996). Biochemistry. 35, 7204-7213. Scholar google search
Lyons C.R., Orloff G.J., Cunningham J.M. (1992). J. ВюГ. Chem. 267, 6370-6374. Scholar google search
Gerber N.C, Ortiz deMontellano PR. (1995). J. Bid. Chem. 270, 17791-17796. Scholar google search
Stuehr D.J., Ikeda-Saito M. (1992). J. Biol. Chem. 267, 20547-20550. Scholar google search
