Для получения водорастворимой формы микросомального цитохрома Р450 2В4 были созданы с помощью генетической инженерии несколько вариантов химерных белков с глутатион-S-трансферазой. В N-концевой район Р450 2В4, лишенный сигнального якорного участка (2-27), были введены специфические аминокислотные последовательности (в позиции 46-49), узнаваемые протеолитическими ферментами (фактор Ха и тромбин). Предполагалось, что ограниченный протеолиз в данном районе даст возможность получить белок, лишенный гидрофобной N-концевой области (1-49). Однако, результаты показали, что выбранный район в Р450 2В4 обладает устойчивостью к действию специфических протеиназ. Положительный результат был получен при проведении ограниченного протеолиза с IgAэндопротеиназой, узнающей нативную последовательность PPGP (31-34) в Р450 2В4. Таким образом, впервые была получена укороченная форма цитохрома 2В4, лишенная 33 N-концевых аминокислотных остатка. Обнаружено, что экспрессия генетически созданных вариантов ГSТ-Р450 2В4 в Escherichia coli сопровождается образованием прочного комплекса с молекулярными клеточными шаперонами GroEL и DnaK. Установлено, что диссоциация комплекса происходит после ограниченного протеолиза: в линкерной последовательности (позиция 6-7), соединяющей С-концевой район ГST домена и N-концевой район Р450 2В4, а также перед N-концевым метионином 2В4 и в позиции 33-34 (2В4). Полученные результаты дают основание предполагать, что взаимодействие с молекулярными шаперонами GroEL/DnaK, вероятно, является необходимым условием для фолдинга эукариотического цитохрома 2В4 в процессе его биосинтеза в E.coli.
Загрузить PDF:
Цитирование:
Прозоровский Т.В., Шунк В.Х., Арчаков А.И. (2001) Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli. Вопросы медицинской химии, 47(3), 315-328.
Прозоровский Т.В. и др. Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli // Вопросы медицинской химии. - 2001. - Т. 47. -N 3. - С. 315-328.
Прозоровский Т.В. и др., "Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli." Вопросы медицинской химии 47.3 (2001): 315-328.
Прозоровский, Т. В., Шунк, В. Х., Арчаков, А. И. (2001). Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli. Вопросы медицинской химии, 47(3), 315-328.
Список литературы
Nelson D.R., Koymans L., Nebert D.W. et al (1996). Pharmacogenetics. 6, 1- 42. Scholar google search
Porter T.D., Coon M.J. (1991). J. Biol. Chem. 266, 13469- 13472. Scholar google search
Guengerich F.P. (1989). in Frontiers in Biotransformation (Ruckpaul K. and Rein K, eds). 1,101- 150. Scholar google search
Cosme J., Johnson E.F. (2000). J. Biological. Chemistry. 275, 2545- 2553. Scholar google search
Williams P.A., Cosme J., Johnson K.F. (2000). Mol. Cell. 5, 121- 131. Scholar google search
Von Wachenfeldt C., Cosme J., Johnson E.F. (1997). Arch. Biochem. Biophys. 339, 107- 114. Scholar google search
Szczesna- Skorupa E., Kemper B.J. (1989). Cell. Biol. 108, 1237- 1243. Scholar google search
Szczesna- Skorupa E., Browne N., Kemper B. (1988). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 85,738- 742. Scholar google search
Sakaguchi M., Mihara K., Sato R. (1987). EMBO J. 6, 2425- 2431. Scholar google search
Sakaguchi M., Mihara K., Sato R. (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. U SA. 81, 3361- 3364. Scholar google search
Monier S., Van Luc P., Adesnik M.J. et al. (1988). Cell. Biol. 107, 457- 470. Scholar google search
von Wachenfeldt C., and Johnson K.F. (1995) in „Cytochrome P450- Structure, Mechanism, and Biochemistry" (Oritz de Montellano P.,ed), Plenum Publishing Corp., NY. 2nd Ed., 183- 223. Scholar google search
