ВОПРОСЫ МЕДИЦИНСКОЙ ХИМИИ (ISSN 0042-8809)

Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli

   
Прозоровский Т.В.1, Шунк В.Х.2, Арчаков А.И.1

1. Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН
2. Центр Молекулярной Медицины Макса-Дельбрюка, Берлин, Германия
Идентификатор PubMed: 11558314
Год: 2001  том: 47  выпуск: 3  страницы: 315-328
Для получения водорастворимой формы микросомального цитохрома Р450 2В4 были созданы с помощью генетической инженерии несколько вариантов химерных белков с глутатион-S-трансферазой. В N-концевой район Р450 2В4, лишенный сигнального якорного участка (2-27), были введены специфические аминокислотные последовательности (в позиции 46-49), узнаваемые протеолитическими ферментами (фактор Ха и тромбин). Предполагалось, что ограниченный протеолиз в данном районе даст возможность получить белок, лишенный гидрофобной N-концевой области (1-49). Однако, результаты показали, что выбранный район в Р450 2В4 обладает устойчивостью к действию специфических протеиназ. Положительный результат был получен при проведении ограниченного протеолиза с IgAэндопротеиназой, узнающей нативную последовательность PPGP (31-34) в Р450 2В4. Таким образом, впервые была получена укороченная форма цитохрома 2В4, лишенная 33 N-концевых аминокислотных остатка. Обнаружено, что экспрессия генетически созданных вариантов ГSТ-Р450 2В4 в Escherichia coli сопровождается образованием прочного комплекса с молекулярными клеточными шаперонами GroEL и DnaK. Установлено, что диссоциация комплекса происходит после ограниченного протеолиза: в линкерной последовательности (позиция 6-7), соединяющей С-концевой район ГST домена и N-концевой район Р450 2В4, а также перед N-концевым метионином 2В4 и в позиции 33-34 (2В4). Полученные результаты дают основание предполагать, что взаимодействие с молекулярными шаперонами GroEL/DnaK, вероятно, является необходимым условием для фолдинга эукариотического цитохрома 2В4 в процессе его биосинтеза в E.coli.
Загрузить PDF:
Цитирование:

Прозоровский, Т. В., Шунк, В. Х., Арчаков, А. И. (2001). Ассоциация цитохрома P450 2B4 с молекулярными шаперонами при гетерологической экспрессии в e.coli. Вопросы медицинской химии, 47(3), 315-328.
Список литературы  
 2002 (том 48)
 2001 (том 47)
 2000 (том 46)
 1999 (том 45)
 1998 (том 44)
 1997 (том 43)
 1996 (том 42)
 1995 (том 41)
 1994 (том 40)
 1993 (том 39)
 1992 (том 38)
 1991 (том 37)
 1990 (том 36)
 1989 (том 35)
 1988 (том 34)
 1987 (том 33)
 1986 (том 32)
 1985 (том 31)