О внеклеточной ДНК крови известно, что она присутствует в очень низких концентрациях и её уровень способен значительно повышаться при некоторых злокачественных опухолях, системной красной волчанке и радиационном поражении. Нашей задачей была разработка количественного метода анализа для исследования уровня ДНК в сыворотке крови человека в норме и при патологии. Для этого были разработаны подходы к индукции антител класса G к нативной ДНК млекопитающих. Успешной оказалась иммунизация кроликов комплексом метилированного БСА с ДНК и в результате у одного из шести животных была получена антисыворотка против нативной ДНК млекопитающих (содержащая помимо иммуноглобулинов класса М антитела класса G). На основе анти-ДНК антител класса G был разработан времяразрешённый иммунофлуоресцентный сэндвич-анализ на ДНК. Чувствительность метода составляет 8 пкг/мл, а рабочий диапазон от 10 пкг до 1000 000 пкг/мл. При помощи времяразрешённого сэндвич-анализа были исследованы образцы сывороток здоровых доноров, больных вирусными гепатитами и аутоиммунным тиреоидитом. Концентрация ДНК в сыворотке здоровых доноров составляет 0,62 ± 0,49 нг/мл (среднее ± среднеквадратическое отклонение). У 19 больных вирусным гепатитом (В или С) и 14 пациентов с аутоиммунным тиреоидитом сывороточная концентрация ДНК значительно повышена и составляет соответственно 2,3 ± 6,6 и 105 ± 175 нг/мл. Высокий уровень внеклеточной ДНК в крови может являться одной из причин индукции ДНК-гидролизующих антител, которые часто встречаются при этих заболеваниях. Поскольку представленный сэндвич-метод способен определять следовые количества ДНК на фоне высоких концентраций белка в сыворотке крови, он может быть также рекомендован для анализа и других биологических жидкостей
Загрузить PDF:
Цитирование:
Шевчук Н.А. (2001) Времяразрешённый иммунофлуоресцентный анализ на ДНК и исследование содержания ДНК в сыворотке человека. Вопросы медицинской химии, 47(4), 439-448.
и др. Времяразрешённый иммунофлуоресцентный анализ на ДНК и исследование содержания ДНК в сыворотке человека // Вопросы медицинской химии. - 2001. - Т. 47. -N 4. - С. 439-448.
и др., "Времяразрешённый иммунофлуоресцентный анализ на ДНК и исследование содержания ДНК в сыворотке человека." Вопросы медицинской химии 47.4 (2001): 439-448.
Шевчук, Н. А. (2001). Времяразрешённый иммунофлуоресцентный анализ на ДНК и исследование содержания ДНК в сыворотке человека. Вопросы медицинской химии, 47(4), 439-448.
Список литературы
Teare J.M., Islam К., Flanagan R., (1997) Biotechniques, 22, 1170- 1174. Scholar google search
Raptis L., Menard H., (19S0) J. Clin. Invest., 66, 1391- 1399. Scholar google search
Vladimirov V.G., Belokhvostov A.S., Sherlina S.S. (1992) Int. J. Radiat. Biol., 62,667- 671. Scholar google search
Shapiro В., Chakrabarty M., Cohn E.M., Leon S.A. (1983) Cancer, 51, 2116- 2120. Scholar google search
Андриевская О.А., (1998) РНК- гидролизующие антитела из сыворотки крови больных системной красной волчанкой: дисс. канд. хим. наук. Новосибирск: НИБХ, 126 с. Scholar google search
Smeenk R.J.Т., (1994) Manual of Biological Markers of Disease, B2.1, 1- 15. Scholar google search
Hemmilu I., Dakubu S., Mukkala V., Siitari H., Lovgren Т. (1984) Anal. Biochem., 137, 335- 343. Scholar google search
Fredriksen K., Brannsether В., Traavik Т., Rekvig O.P. (1991) Scand. J. Immunol, 34, 109- 119. Scholar google search
Borel H., Sasaki Т., Stollar D., Bprel Y. (1984) J. Immunol. Methods, 67, 289- 302. Scholar google search
