Предложен метод интегративной оценки тканевого и субклеточного распределения изатин-связывающих белков. Принцип метода основан на мониторинге изменения оптических характеристик поверхности биосенсора при образовании комплексов между растворимым белком и иммобилизованным лигандом - изатином. Важным условием применения этого метода является возможность солюбилизации исследуемых субклеточных фракций детергентом (1% раствор тритона Х-100). В качестве иммобилизованного лиганда использован 5-аминоизатин. Иммобилизацию осуществляли за счет образования пептидной связи между аминогруппой этого аналога изатина и активированной карбоксильной группой декстрановой подложки ячейки биосенсора. В митохондриях печени изатин-связывающие белки сосредоточены преимущественно во фракции внешних мембраны. Обработка митохондрий ацетиленовыми ингибиторами хлоргилином и депренилом в концентрации (1 мкМ), преимущественно тормозящей активность МАО А и МАО Б, соответственно, приводила к существенному уменьшению интенсивности сигнала и изменению формы кинетической кривой. Эти результаты согласуются с представлениями о том, что в митохондриях именно МАО является основной мишенью действия изатина. Добавление обработанных раствором тритона Х-100 препаратов мембранной и растворимой фракций мозга, печени, сердца и почек в кювету также приводило к появлению характерного ответа, свидетельствующего о связывании белков иммобилизованным 5-аминоизатином. В мозге, печени и сердце связывание преобладало в случае мембранных фракций, в то время как в почках связывание с изатином былом выше в растворимой фракции.
Загрузить PDF:
Цитирование:
Иванов Ю.Д., Панова Н.Г., Гнеденко О.В., Бунеева О.А., Медведев А.Е., Арчаков А.И. (2002) Исследование тканевого и субклеточного распределения изатин-связывающих белков при помощи оптического биосенсора. Вопросы медицинской химии, 48(1), 73-83.
Иванов Ю.Д. и др. Исследование тканевого и субклеточного распределения изатин-связывающих белков при помощи оптического биосенсора // Вопросы медицинской химии. - 2002. - Т. 48. -N 1. - С. 73-83.
Иванов Ю.Д. и др., "Исследование тканевого и субклеточного распределения изатин-связывающих белков при помощи оптического биосенсора." Вопросы медицинской химии 48.1 (2002): 73-83.
Иванов, Ю. Д., Панова, Н. Г., Гнеденко, О. В., Бунеева, О. А., Медведев, А. Е., Арчаков, А. И. (2002). Исследование тканевого и субклеточного распределения изатин-связывающих белков при помощи оптического биосенсора. Вопросы медицинской химии, 48(1), 73-83.
Список литературы
Medvedev A.E., Clow A,, Sandier M., Glover V. (1996) Biochem. Pharmacol., 52, 385- 391. Scholar google search
Гловер В.,Медведев А.Е., Сандлер М. (1997) Вопр. мед. химии, 43,515- 521. Scholar google search
Glover V., Bbattacharya S.K., Charkrabarti A., Sandier M. (1998) Stress Med, 14, 225- 229. Scholar google search
Sandier M., Medvedev A.E., Panova N.G., Matta S., Glover V. (2000) In: Milestones in monoamine oxidase research: discovery of (- )deprenyl (K.Magyar and E S.Visi eds.) Meditcina Publishing House Co.,, Budapest, pp. 237- 251. Scholar google search
Pang F- Y., Hucklebndge F.H., Forster G , Tan K., Clow A. (1996) Stress Med, 12, 35- 42. Scholar google search
Hamanue N., Yamazaki N., Minami M., Endo T., Hirahuji M., Monma Y., Tbgashi H. (1998) Gen. Pharmacol. 30, 387- 91. Scholar google search
Mowatari K., Segawa M., Nasatsuka R., Hanawa Y., Iinuma F., Watanabe M. (2001) Analyst, 126, 33- 36. Scholar google search
Medvedev A.E., Sandier M., Glover V. (1998) Life Sci., 62, 2391- 2398. Scholar google search
Glover V., Medvedev A., Sandier M. (1995) Life ScL 57, 2073- 2079. Scholar google search
Archakov A.I., Ivanov Yu.D. (1999) In Biophysics of Electron Transfer and Molecular Bioelectronics, Plenum Publication Corporation, pp. 173- 194. Scholar google search
Koval W., Gnedenko O.V., Ivanov Yu.D., Fedorova O.S., Archakov A.I., Knorre D.G. (1999) IUВМВ LIFE, 48,1- 4. Scholar google search
Морозов С.Т., Иванов Ю.Д., Учайкин В.Ф., Каражас Н.В., Бахрушина С.Б., Гнеденко О.В., Конев В.А, Ковалев О.Б., Арчаков А.И. (1999) Новости Науки и Техники. Серия Медицина. Аллергия, Астма и клиническая иммунология, 9,187- 189. Scholar google search
Ivanov Yu.D., Kanaeva I.P., Archakov A.I. (2000) Biochem. Biophys. Res Commun. 273,750- 752. Scholar google search
Medvedev A.E., Goodwin B.L., Sandier M., Glover V. (1999) Eur. J. Pharmacol. 57,913- 915. Scholar google search
Панова H.T. (2001) Исследование обмена компонентов эндогенного ингибитора моноаминоксидаз трибулина и его взаимодействия с ферментами in vivo и in vitro. Дисс. канд биол. наук НИИ биомедицинской химии РАМН. Scholar google search
Panova N.G., Buneeva О.A., Gnedenko O.V., Medvedeva M.V., Ivanov Yu.D., Glover V., Sandier M., and Medvedev A.E. (2000) 9th Amine oxidase work shop. The millenium meeting. Universitat Autonoma, Barcelona, p. 60. Scholar google search
