Определение гормона тироксина (Т4) является подтверждающим тестом на врожденный гипотиреоз, который в 70% случаев протекает бессимптомно. Нами разработан метод иммунофлуоресцентного анализа тироксина для неонатального скрининга с использованием моноклональных антител и тироксина, меченного европием, в сухих пятнах крови для флуоресцентного иммуноанализа с временным разрешением (ФИАВР) с использованием импульсного спектрофлуорометра DELFIA Plate Fluorometer 1232 ("Wallac", Финляндия) и его последующих модификаций, которыми оборудованы региональные центры неонатального скрининга.
Получены, охарактеризованы и стандартизированы препараты моноклональных антител: определены классы/подклассы иммуноглобулинов (IgG 2b, IgG 1), константы связывания (107 - 108 М-1), перекрестная реактивность с агентами, гомологичными по структуре с Т4 (0-2% перекреста). Отобраны наиболее устойчивые клоны с константой аффинности 108 М-1, позволяющие детектировать уровень концентрации общего тироксина в крови.
Синтезированы конъюгаты хелата европия с тироксином. Оптимизирован состав буфера для анализа Т4, который включает салицилат натрия в концентрации 2 мг/мл и этилендиаминтетрауксусную кислоту в концентрации 2 мМ.
Предел детекции тироксина в сухих пятнах крови составляет 10 нМ, при коэффициенте вариации не более 15 %, что позволяет диагностировать сниженный уровень общего тироксина. Точность анализа тироксина оценена с помощью набора сывороток для межлабораторного контроля качества Lipochek Immunoassay Plus Control KitTM ("BioRad", США). Полученные значения укладываются в доверительный интервал концентраций Т4, указанный для сывороток, что говорит о надежности разработанного метода.
Загрузить PDF:
Цитирование:
Жердева В.В., Чудинов А.В., Савицкий А.П. (2003) Использование метода лантанидного флуоресцентного иммуноанализа для определения гормона тироксина в сухих пятнах крови. Биомедицинская химия, 49(1), 70-79.
Жердева В.В. и др. Использование метода лантанидного флуоресцентного иммуноанализа для определения гормона тироксина в сухих пятнах крови // Биомедицинская химия. - 2003. - Т. 49. -N 1. - С. 70-79.
Жердева В.В. и др., "Использование метода лантанидного флуоресцентного иммуноанализа для определения гормона тироксина в сухих пятнах крови." Биомедицинская химия 49.1 (2003): 70-79.
Жердева, В. В., Чудинов, А. В., Савицкий, А. П. (2003). Использование метода лантанидного флуоресцентного иммуноанализа для определения гормона тироксина в сухих пятнах крови. Биомедицинская химия, 49(1), 70-79.
Список литературы
Harland W.A., Orr I.S. (1975) Thyroid hormone metabolism, N. Y. Acad.Press, pp.335- 345. Scholar google search
