Эффективный метод очистки ДНК из загрязненных объектов и оптимизация амплификации

   
Федченко В.И.1 ">, Гурьев С.О.1, Калошин А.А.1

1. Государственное учреждение Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича, РАМН
Раздел: Краткое сообщение
Идентификатор PubMed: 15179830
Год: 2004  том: 50  выпуск: 2  страницы: 211-216
Предложен способ выделения и очистки ДНК из сильнозагрязненных предметов-носителей. Он включает: 1) стандартную обработку биоматериала протеиназой К с последующей фенол-хлороформной экстракцией; 2) освобождение от катионов на смоле дауэкс-50W и низкомолекулярных примесей гель фильтрацией на сефадексе G-50. Синтезированы модифицированные олигонуклеотидные праймеры и оптимизированы условия амплификации для двух variable namber of tandem repeats (VNTR) локусов аполипопротеин В (ароВ) и D17S5, широко применяющихся при ДНК-типировании человека с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Повышение стабильности и специфичности амплификации VNTR локусов ароВ и D17S5 достигнуто благодаря оптимизации длины и состава праймеров и изменения режима амплификации. Чувствительность предложенного способа амплификации составляет 2-4 нг ДНК-матрицы. Использование условий "гнездовой" амплификации для локуса ароВ позволило добиться повышения чувствительности метода до нескольких копий ДНК мишени.
Загрузить PDF:
Ссылка:

Федченко В.И., Гурьев С.О., Калошин А.А. (2004) Биомедицинская химия, 50(2), 211-216.
Список литературы  
 2019 (том 65)
 2018 (том 64)
 2017 (том 63)
 2016 (том 62)
 2015 (том 61)
 2014 (том 60)
 2013 (том 59)
 2012 (том 58)
 2011 (том 57)
 2010 (том 56)
 2009 (том 55)
 2008 (том 54)
 2007 (том 53)
 2006 (том 52)
 2005 (том 51)
 2004 (том 50)
 2003 (том 49)