Предложен способ выделения и очистки ДНК из сильнозагрязненных предметов-носителей. Он включает: 1) стандартную обработку биоматериала протеиназой К с последующей фенол-хлороформной экстракцией; 2) освобождение от катионов на смоле дауэкс-50W и низкомолекулярных примесей гель фильтрацией на сефадексе G-50. Синтезированы модифицированные олигонуклеотидные праймеры и оптимизированы условия амплификации для двух variable namber of tandem repeats (VNTR) локусов аполипопротеин В (ароВ) и D17S5, широко применяющихся при ДНК-типировании человека с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Повышение стабильности и специфичности амплификации VNTR локусов ароВ и D17S5 достигнуто благодаря оптимизации длины и состава праймеров и изменения режима амплификации. Чувствительность предложенного способа амплификации составляет 2-4 нг ДНК-матрицы. Использование условий "гнездовой" амплификации для локуса ароВ позволило добиться повышения чувствительности метода до нескольких копий ДНК мишени.
Загрузить PDF:
Цитирование:
Федченко В.И., Гурьев С.О., Калошин А.А. (2004) Эффективный метод очистки ДНК из загрязненных объектов и оптимизация амплификации. Биомедицинская химия, 50(2), 211-216.
Федченко В.И. и др. Эффективный метод очистки ДНК из загрязненных объектов и оптимизация амплификации // Биомедицинская химия. - 2004. - Т. 50. -N 2. - С. 211-216.
Федченко В.И. и др., "Эффективный метод очистки ДНК из загрязненных объектов и оптимизация амплификации." Биомедицинская химия 50.2 (2004): 211-216.
Федченко, В. И., Гурьев, С. О., Калошин, А. А. (2004). Эффективный метод очистки ДНК из загрязненных объектов и оптимизация амплификации. Биомедицинская химия, 50(2), 211-216.
Список литературы
Midler S.A., Dykes D.D. and Polesky H.F. (1982) Nucl. Acids Res.. 16, 1215- 1223. Scholar google search
Lin D., Blom B. and Flolmlund G. (1988) Gene Anal. Techn., 5, 97- 101. Scholar google search
Gustincich S., Manfioletti G., Del Sal G., Carninci P. (1991) BioTechniques., 11, 298- 302. Scholar google search
Roos J.A., Nelson G.B., Holden K.L., (1992) Nucl. Acids Res., 19, 6053- 6054. Scholar google search
Zeillinger R., Schneeberger C., Speiser P., Kury F. (1993) Bio- Techniques., 14, 202- 203. Scholar google search
Ефремов И.А., Носиков В.В., Скоблилов Е.Ю., Законова А.Ф., Иванов П.Л. (2001) Судебно- медицинская экспертиза, 44, 11- 17. Scholar google search
Comay C.T., Koons В. W., Presley К.W., Smerick J.B., Sobciralski C.A., Stanley D.M., Bacchtel F.B. (1994) J. Forensic Sci., 39, 1254- 1269. Scholar google search
Hochmeister M.N., Budowle В., Borer U.V., Eggmann U., Сотеу С Т., Dirnholer R. (1991) J. Forensic Sci., 36, 1649- 1661. Scholar google search
Lahiri D.K., Bye S., Nurnberger J.I., Hades M.E., Crisp M. (1992) J. of Biochem. Biophys. Meth., 25, 193- 205. Scholar google search
Honda K., Nakatome M., Islam M.M., Bai H., Ogura Y., Kuroki H., Yamazaki M., Terada M., Misawa S., Wakasugi С. (1995) Forensic Sci., 40, 637- 640. Scholar google search
Schmitl C., Schmutzler A., Prim M., Staak M. (1994) Forensic Sci Int.. 66, 129- 41. Scholar google search
Maniatis Т., Fritach E.F andSambrook (1993) J. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. Scholar google search
Boerwinkle E., Xiong W., Fourest E. and Chan L. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 212- 216. Scholar google search
G. Т., Richards В., and Klinger K. W. (1989) Nucl. Acids Res., 17, 2140. Scholar google search
Hagelberg E., Sykes В., and Hedges R. (1989) Nature. 342, 485. Scholar google search
Singer- Sam J., Tanguay R.L., Riggs A. (1989) Amplifications, 3, 11. Scholar google search
Walsh P.S., Metzger D.A., Higuchi R. (1991) Bio- Techniques, 10, 506- 513. Scholar google search
