Выделены и охарактеризованы высокоочищенные препараты мембран клеток печени мыши. Получены 1D- и 2D-электрофореграммы и на их основе проведен сравнительный анализ белкового состава микросом и их "теней" (мембраны, очищенные от "балластных" белков) клеток печени до и после введения мышам фенобарбитала (индуктор цитохромов Р450). Разработанные методы и подходы позволили выявить до 1000 белков на 2D-электрофореграммах исследованных образцов мембран микросом клеток печени. В результате индукции в области 45-60 кДа (соответствующей молекулярному весу цитохромов Р450) обнаружено около 30 новых белков; в области 17 кДа (соответствующей молекулярному весу цитохрома b5) появилось 4 дополнительных белковых пятна и по всей области электрофореграммы "исчезло" 20 белков. При сравнении 2D-электрофореграмм микросом и "теней" в последних обнаружено уменьшение содержания растворимых белков. Разделение белков теней микросом методом одномерного электрофореза и последующий масс-спектрометрический анализ позволили идентифицировать цитохромы Р450. Полученные в данной работе результаты показали эффективность использования комбинации различных методов протеомного анализа (одномерный и двумерный электрофорез, масс-спектрометрия, биоинформатика, ферментная активность) для изучения биологического материала тканей животных, что в последующем будет использовано для инвентаризации цитохромов Р450 в различных тканях человека.
Канаева И.П. и др. Исследование микросом клеток печени мыши методами протеомного анализа // Биомедицинская химия. - 2004. - Т. 50. -N 4. - С. 367-375.
Канаева И.П. и др., "Исследование микросом клеток печени мыши методами протеомного анализа." Биомедицинская химия 50.4 (2004): 367-375.
Канаева, И. П., Петушкова, Н. А., Лохов, П. Г., Згода, В. Г., Карузина, И. И., Лисица, А. В., Арчаков, А. И. (2004). Исследование микросом клеток печени мыши методами протеомного анализа. Биомедицинская химия, 50(4), 367-375.
Список литературы
Archakov A.I., Bachmanova G.I. (1990) Cytochrome P450 and Active Oxygen, Taylor and Francis, London. Scholar google search
Rozman D., Waterman M.R. (1998) Drug Metab. Dispos., 26, 1199- 1201. Scholar google search
Whitlocock J.P.J., Denison M.S. (1995) in: Cytochrome P450: Structure, Mechanism, Biochemistry (Ortiz de Montellano P.R. ed.) Plenum Press: New York, p. 391. Scholar google search
Lewis D.F.V. (2001) Guide to Cytochromes P450. Structure and Function, Taylor and Francis, London and New York. Scholar google search
