1. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии Программа по молекулярной и клеточной онкологии, Институт биомедицинских наук, Университет Джорджа Вашингтона 2. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии корпорация Human Genome Sciences
Раздел: Экспериментальные/клинические исследование
Клеточные ганглиозиды участвуют во взаимодействиях между раковой опухолью и иммунной системой пациента. Для исследования их роли в формировании опухоли и ангиогенезе, мы разработали модель, основанную на антисмысловом ингибировании GM3-синтазы, одного из базовых ферментов в биосинтезе ганглиозидов. Получен ряд трансфицированных клонов клеточной линии DAOY (медуллобластомы человека), из которых выделены несколько клонов, которые стабильно экспрессировали 560-нуклеотидный фрагмент кДНК GM3-синтазы в смысловой или антисмысловой ориентации, а также клонов, трасфицированных пустым вектором. Все клеточные клоны перманентно интегрировали экспрессионные вектора в свою геномную ДНК. Полученные клоны были проанализированы на содержание ганглиозидов при помощи экстракции клеточных липидов, выделения ганглиозидов и применения высоко эффективной тонкослойной хроматографии. У одного из антисмысловых клонов, названного 7.2А, уровень ганглиозидов был снижен на 70%. Во всех контрольных клонах (трансфицированных смысловым и "пустым" векторами) содержание ганглиозидов не отличалось от нетрансфицированных клеток DAOY. Тем не менее, после 10-ти пассажей в культуре, уровень ганглиозидов у клона 7.2А возвращался к норме, несмотря на неизменно высокий уровень экспрессии антисмысловой мРНК. Следовательно, трансфекция клеток антисмысловой РНК может иногда вызывать только временное ингибирование экспрессии продукта-мишени.
Шевчук Н.А., Манила Дж., Нусинович Е.А., Ладиш С. (2006) Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов. Биомедицинская химия, 52(3), 245-257.
Шевчук Н.А. и др. Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов // Биомедицинская химия. - 2006. - Т. 52. -N 3. - С. 245-257.
Шевчук Н.А. и др., "Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов." Биомедицинская химия 52.3 (2006): 245-257.
Шевчук, Н. А., Манила, Дж., Нусинович, Е. А., Ладиш, С. (2006). Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов. Биомедицинская химия, 52(3), 245-257.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750807010106
Chang F., Li R., Noon K., Gage D., Ladisch S. (1997) Glycobiology, 7, 523-530. Scholar google search
Chang F., Li R., Ladisch S. (1997) Exp. Cell. Res., 234, 341-346. Scholar google search
Yamashita T., Hashiramoto A., Haluzik M., Mizukami H., Beck S., Norton A., Kono M., Tsuji S., Daniotti J. L., Werth N., Sandhoff R., Sandhoff K., Proia R. L. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100, 3445-3449. Scholar google search
Weiss B., Davidkova G., Zhou L. W. (1999) Cell. Mol. Life Sci., 55, 334-358. Scholar google search
Deng W., Li R., Guerrera M., Liu Y., Ladisch S. (2002) Glycobiology, 12, 145-152. Scholar google search
Crowley T.E., Nellen W., Gomer R.H., Firtel R.A. (1985) Cell, 43, 633-641. Scholar google search
Mizuno T., Chou M. Y., Inouye M. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 1966-1970. Scholar google search
Adelman J.P., Bond C.T., Douglass J., Herbert E. (1987) Science, 235, 1514-1517. Scholar google search
