Для выявления и идентификации форм цитохрома Р450 высокоочищенных мембран микросом печени человека были использованы методы протеомного анализа, которые включали разделение белков с помощью одномерного и двумерного электрофореза (1D и 2D) и молекулярное сканирование методом масс-спектрометрии участка геля в диапазоне 45-66 кДа (область, соответствующая молекулярной массе цитохромов Р450). Анализ содержания белков проводили по оригинальной технологии 1D-ZOOMER, которая позволяла осуществлять обработку массива масс-спектров, а не единичных масс-спектров, как принято в стандартных методиках. В области 45-66 кДа было идентифицировано 13 микросомальных мембранных белков, в том числе такие формы цитохрома Р450, как 1А2, 1В1, 2А6, 2Е1, 2C8, 2С9, 2С10, 2D6, 3А4, 4A11, 4F2. Исследование ферментной активности цитохромов Р450 семейств 1А, 2В, 2С, 3А и 2Е в микросомах клеток печени человека выявило снижение скоростей О-деалкилирования и N-деметилирования цитохромов Р450 1А1/1А2 и 3А4 при патологии, в то время как активности 7-бензоксирезоруфин-О-дебензилазы (характеризует суммарную активность CYP2B и CYP2C), цитохрома Р450 2Е1 (окисление метанола), 7-пентоксирезоруфин-О-деалкилазы (CYP 2B), 7-этокси- и 7-метоксикумарин-О-деалкилаз (CYP 2B1) практически не изменялись. На основании полученных результатов показана эффективность использования комбинации протеомного и биохимического анализов для инвентаризации цитохромов Р450 и выявления уровня их экспрессии, обсуждаются возможности масс-спектрометрии для количественной оценки белков.
Петушкова Н.А., Лисица А.В., Карузина И.И., Згода В.Г., Шереметьева Г.Ф., Саменкова Н.Ф., Никитин И.П., Сахарова Т.А., Копылов А.Т., Арчаков А.И. (2007) Идентификация цитохромов P450 микросом клеток печени человека с помощью масс-спектрометрии. Биомедицинская химия, 53(4), 400-411.
Петушкова Н.А. и др. Идентификация цитохромов P450 микросом клеток печени человека с помощью масс-спектрометрии // Биомедицинская химия. - 2007. - Т. 53. -N 4. - С. 400-411.
Петушкова Н.А. и др., "Идентификация цитохромов P450 микросом клеток печени человека с помощью масс-спектрометрии." Биомедицинская химия 53.4 (2007): 400-411.
Петушкова, Н. А., Лисица, А. В., Карузина, И. И., Згода, В. Г., Шереметьева, Г. Ф., Саменкова, Н. Ф., Никитин, И. П., Сахарова, Т. А., Копылов, А. Т., Арчаков, А. И. (2007). Идентификация цитохромов P450 микросом клеток печени человека с помощью масс-спектрометрии. Биомедицинская химия, 53(4), 400-411.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1007/s11828-008-1004-1
Список литературы
Lewis D.F.V. (2001) Guide to Сytochrome P450. Structure and Function. Taylor and Francis, London and New York . Scholar google search
Archakov A.I., Bachmanova G.I. (1990) Cytochrome P450 and Active Oxygen, Taylor and Francis, London. Scholar google search
Rozman D., Waterman M.R. (1998) Drug Metab. Dispos., 26, 1199-1201. Scholar google search
Whitoclock J.P.J., Denison M.S. (1995) in Cytochrome P450: Structure, Mechanism, Biochemistry (Ortiz de Montellano P.R. ed.) Plenum Press: New York, р. 391. Scholar google search
Wasinger V.C., Cordwell S.J., Cerpa-Poljak A., Yan J.X., Gooley A.A., Wilkins M.R., Duncan M.W., Harris R., Williams K.L., Humphery-Smith I. (1995) Electrophoresis, 16, 1090-1094. Scholar google search
Humphery-Smith I., Cordwell S.J., Blackstock W.P. (1997) Electrophoresis, 18, 1217-1242. Scholar google search
Gerber S.A., Rush J., Stemman O., Kirschner M.W., Gygi S.P (2003) Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1000, 6940-6945. Scholar google search
