Взаимодействия между цитохром Р450 2В4 (d-2B4), NADPH-цитохром Р450 редуктазой (d-Fp) и цитохромом b5 (d-b5) в мономерной реконструированной Р450 2В4-содержащей монооксигеназной системе были исследованы с помощью оптического биосенсора в присутствии NADPH и 7-пентоксирезоруфина (т.е. в гидроксилирующих условиях). Для этого каждый из партнеров был иммобилизован по аминогруппам на карбоксиметилдекстрановую поверхность биочипа оптического биосенсора IAsys+. Такая иммобилизация белков не приводила к потере их активности в биочипе. Зарегистрировано формирование бинарных d-Fp/d-2B4 комплексов. Константы скоростей ассоциации/диссоциации реакции комплексообразования составляли (kon /koff)=(0,013±0,005)·106·M-1·с-1/ 0,05±0,02 с-1, а константа диссоциации KD = (0,26±0,13)·10-6 M. Сравнение kon, koff и KD для d-Fp/d-2B4 комплексов, формирующихся в условиях гидроксилирования (О-деалкилирования), с соответствующими константами для окисленных форм белков - (0,10±0,03)·106·M-1·с-1/ (0,14±0,06) с-1, (0,71±0,37)·10-6 M - показывает снижение kon и в незначительной степени КD за счёт увеличения времени жизни комплексов при переходе от окисленного состояния к условиям гидроксилирования. Формирование комплексов между d-Fp и d-b5 не было зарегистрировано как в условиях гидроксилирования, так и для окисленных форм белков. В обоих случаях показано формирование тройных комплексов d-Fp/d-2B4/d-b5.
Иванов Ю.Д., Иванов А.В., Петушкова Н.А., Гара О.Г., Кузнецов В.Ю., Подоплелов А.В., Арчаков А.И. (2008) Оптико-биосенсорный анализ взаимодействий редокс-партнеров цитохром P450 2B4 - содержащей монооксигеназной системы в условиях гидроксилирования. Биомедицинская химия, 54(4), 435-444.
Иванов Ю.Д. и др. Оптико-биосенсорный анализ взаимодействий редокс-партнеров цитохром P450 2B4 - содержащей монооксигеназной системы в условиях гидроксилирования // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. -N 4. - С. 435-444.
Иванов Ю.Д. и др., "Оптико-биосенсорный анализ взаимодействий редокс-партнеров цитохром P450 2B4 - содержащей монооксигеназной системы в условиях гидроксилирования." Биомедицинская химия 54.4 (2008): 435-444.
Иванов, Ю. Д., Иванов, А. В., Петушкова, Н. А., Гара, О. Г., Кузнецов, В. Ю., Подоплелов, А. В., Арчаков, А. И. (2008). Оптико-биосенсорный анализ взаимодействий редокс-партнеров цитохром P450 2B4 - содержащей монооксигеназной системы в условиях гидроксилирования. Биомедицинская химия, 54(4), 435-444.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750808040069
Список литературы
Archakov A.I., Bachmanova G.I. (1990) Cytochrome P450 and Active Oxygen, Taylor&Francis, London, New York, Philadelphia. Scholar google search
Yeung D., Gill A., C.H. Maule, R.J. Davies (1995) Trends in Anal. Chem., 14, 49-56. Scholar google search
Jonsson U., Fagerstam L., Ivarsson B., Johnsson B., Karlsson R., Lundh K., Lofas S., Persson B., Roos H., Ronnberg I. (1991) BioTechniques, 11, 620-627. Scholar google search
Way S., Hill B. (1996) Methods Guide for IAsys plus and IAsys Auto+. Affinity Sensors. Human-Computer Interface Limited, Cambridge, England. Scholar google search
