В работе были определены сайты взаимодействия белков-партнеров цитохрома Р450 2В4 (d-2B4) и NADPH:цитохром Р450 редуктазы (d-Fp). Эти белки образуют комплексы в процессе их функционирования. В работе был использован сшивающий агент 4-4'-дитио(бисфенил)азид для неспецифического ковалентного сшивания комплексов d-2B4 с d-Fp в мономеризованой с помощью Эмульгена-913 системе. Ковалентно сшитые пептиды в этом комплексе идентифицировали с помощью ESI-MS/MS. Было выявлено несколько мест связывания этих белков друг с другом. На их основе создана модель межмолекулярных взаимодействий белков. Эта модель включает 5 мест контактов d-2B4 с d-Fp, стабилизированных кросслинкером в которые вовлечены следующие пептиды d-2B4 и d-Fp (перечислены попарно): 1) d-2B4423-433 и d-Fp102-109; 2) d-2B4324-336 и d-Fp570-585; 3) d-2B4327-336 и d-Fp452-464; 4) d-2B4192-197 и d-Fp456-464; 5) d-2B4134-139 и d-Fp406-425. Притом, в двух последних случаях пептиды d-Fp располагаются в междоменной щели и стабилизируют белок-белковый комплекс через нанозонд-кросслинкер, поэтому образование комплексов d-2B4/d-Fp по этим сайтам может включать а.о. окружающих междоменную щель пептиды d-Fp456-464 и d-Fp406-425.
Иванов А.В., Копылов А.Т., Згода В.Г., Торопыгин И.Ю., Хряпова Е.В., Иванов Ю.Д. (2010) Масс-спектрометрическая идентификация сайтов взаимодействия цитохрома P450 2в4 с nadph:цитохром P450 редуктазой. Биомедицинская химия, 56(1), 40-54.
Иванов А.В. и др. Масс-спектрометрическая идентификация сайтов взаимодействия цитохрома P450 2в4 с nadph:цитохром P450 редуктазой // Биомедицинская химия. - 2010. - Т. 56. -N 1. - С. 40-54.
Иванов А.В. и др., "Масс-спектрометрическая идентификация сайтов взаимодействия цитохрома P450 2в4 с nadph:цитохром P450 редуктазой." Биомедицинская химия 56.1 (2010): 40-54.
Иванов, А. В., Копылов, А. Т., Згода, В. Г., Торопыгин, И. Ю., Хряпова, Е. В., Иванов, Ю. Д. (2010). Масс-спектрометрическая идентификация сайтов взаимодействия цитохрома P450 2в4 с nadph:цитохром P450 редуктазой. Биомедицинская химия, 56(1), 40-54.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750809040052
Список литературы
Porter T.D., Coon M.J. (1991) J. Biol. Chem., 266, 13469-13472. Scholar google search
Guengerich F.P. (2001) in: Cytochrome P450. Enzyme Systems that Metabolise Drugs and Other Xenobiotics (Ioannides C. ed.), John Wiley Sons Ltd. Scholar google search
Archakov A.I., Bachmanova G.P. (1990) Cytochrome P450 and active oxygen. Taylor and Francis, N.Y. Scholar google search
Wang M., Roberts D.L., Paschke R., Shea T.M., Masters B.S.S., Kim J.-J.P. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA,. 94, 8411-8416. CrossRef Scholar google search
Chang Y.-T., Stiffelman O.B., Vakser I.A., Loew G.H., Bridges A., Waskell L. (1997) Protein Engineering, 10,119-129. CrossRef Scholar google search
Scott E.E., He Y.A., Wester M.R., White M.A., Chin C.C., Halpert J.R., Johnson E.F., Stout C.D. (2003) PNAS, 100, 13196-13201. CrossRef Scholar google search
