Сконструирован оригинальный вектор pEM-(dT)40f(+), который может быть использован для получения полноразмерных кДНК с полиаденилированных мРНК, выделенных из различных источников. Вектор pGEM-(dT)40f(+) переводится в одноцепочечную, а затем в линейную форму, содержит на 3'-конце гомополимерный остаток (dТ)40 и служит вектором-праймером (ВП) для синтеза первой цепи кДНК. Использование синтетического олигонуклеотида, комплементарного к вектору и рекомбинантной ДНК, приводит к кольцеванию вектора и синтезу второй цепи ДНК. Такой подход имеет ряд преимуществ: (1) получение кДНК библиотек упрощено и состоит из трёх этапов; (2) получение полноразмерных кДНК молекул достигается вследствие добавления на 5'-конец гомополимера (dС)n; (3) для получения библиотеки клонов требуется несколько микрограмм тотальной РНК; (4) можно получать клоны кДНК до 10 г.п.о; (5) для получения кДНК не используется ПСР-реакция, которая часто вызывает артефактные мутации в кДНК последовательности; (6) не образуются химерные продукты кДНК и не используется обработка рестриктазами.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: библиотека кДНК клонов, вектор-праймер, полноразмерные кДНК, синтез кДНК
Цитирование:
Федченко В.И., Калошин А.А., Медведев А.Е. (2010) Разработка нового вектора для получения полноразмерных библиотек кДНК. Биомедицинская химия, 56(3), 329-341.
Федченко В.И. и др. Разработка нового вектора для получения полноразмерных библиотек кДНК // Биомедицинская химия. - 2010. - Т. 56. -N 3. - С. 329-341.
Федченко В.И. и др., "Разработка нового вектора для получения полноразмерных библиотек кДНК." Биомедицинская химия 56.3 (2010): 329-341.
Федченко, В. И., Калошин, А. А., Медведев, А. Е. (2010). Разработка нового вектора для получения полноразмерных библиотек кДНК. Биомедицинская химия, 56(3), 329-341.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750810040050
