Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием
Поздеев В.К.1 , Поздеев Н.В.2
1. Научно-исследовательский институт гриппа Северо-Западного отделения РАМН 2. Department of Medicine, Harbor Hospital
Раздел: Экспериментальные/клинические исследование
Описан простой и чувствительный метод определения общего гомоцистеина, общего цистеина, общего глутатиона (GSH+GSSG) и нейроактивных аминокислот (Asp, Glu, Tau, GABA) при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с предколоночной дериватизацией орто-фталевым альдегидом и флуориметрическим детектированием на длинах волн 360 и 470 нм для возбуждения и эмиссии, соответственно. Дериватизацию орто-фталевым альдегидом осуществляли в присутствии 2-меркаптоэтанола после S-карбоксиметилирования свободных сульфгидрильных групп йодоуксусной кислотой. Для определения аминотиолов, дисульфидные связи восстанавливали и связанные с белками тиолы высвобождали, добавляя дитиотрейтол к плазме. Преимущество этого метода заключается в возможности одновременного определения как гомоцистеина/цистеина/глутатиона, так и нейроактивных аминокислот в пробе. Уровни исследованных веществ были определены в плазме крови 14 здоровых волонтеров (20-45 лет) и 55 больных хроническим гепатитом C (20-49 лет). Полученные значения соответствовали ранее опубликованным данным об уровнях этих веществ в плазме. Калибровочные кривые были линейными в диапазоне концентраций 5-100 мкМ в плазме крови (r2=0,985-0,996). Коэффициент вариации, рассчитанный по повторным исследованиям пробы, произведенным в один день и в течение нескольких дней, составлял 3-6% и 4-7%, соответственно. Воспроизводимость определения стандартов, добавленных в плазму составляла 94-102%. Лимит детектирования составлял 0,2-0,5 нг в 10 мкл анализируемой пробы (соотношение сигнал/шум - 3).
Загрузить PDF:
Ключевые слова: аминотиолы, аминокислоты, плазма, ВЭЖХ, гепатит С
Цитирование:
Поздеев В.К., Поздеев Н.В. (2010) Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием. Биомедицинская химия, 56(6), 726-738.
Поздеев В.К. и др. Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием // Биомедицинская химия. - 2010. - Т. 56. -N 6. - С. 726-738.
Поздеев В.К. и др., "Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием." Биомедицинская химия 56.6 (2010): 726-738.
Поздеев, В. К., Поздеев, Н. В. (2010). Определение общих аминотиолов и нейроактивных аминокислот в плазме крови при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием. Биомедицинская химия, 56(6), 726-738.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S199075081003011X
Ventura P., Rosa M.C., Abbati G., Marchini S., Grandone E., Vergura P., Tremosini S., Zeneroli M.L. (2005) Liver Int., 25, 49-56. CrossRef Scholar google search
Wang W., Rusin O., Xu X., Kim K.K., Escobedo J.O., Fakayode S.O., Fletcher K.A., Lowry M., Schowalter C.M., Lawrence C.M., Fronczek F.R., Warner I.M., Strongin R.M. (2005) J. Am. Chem. Soc., 127, 15949-15958. CrossRef Scholar google search
Grant S.L., Shulman Y., Tibbo P., Hampson D.R., Baker G.B. (2006) J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci., 844, 278-282. CrossRef Scholar google search
Pozdeev V.K. (1981) In: Psychophysiology Today and Tomorrow, (Bechtereva, N.P., Ed.), Pergamon Press, Oxford, New York, pp. 227-235. CrossRef Scholar google search
Andersson A., Lindgren A., Hultberg B. (1995) Clin. Chem., 41, 361-366. Scholar google search
Togawa T., Sengupta S., Chen H., Robinson K., Nonevski I., Majors A.K., Jacobsen D.W. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun., 277, 668-674. CrossRef Scholar google search
Rizzo V., Montalbetti L., Valli M., Bosoni T., Scoglio E., Moratti R. (1998) J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl., 706, 209-215. CrossRef Scholar google search
Katrusiak A.E., Paterson P.G., Kamencic H., Shoker A., Lyon A.W. (2001) J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl., 758, 207-212. CrossRef Scholar google search
Paroni R., De V. E., Cighetti G., Arcelloni C., Fermo I., Grossi A., Bonini P. (1995) Clin. Chem., 41, 448-454. Scholar google search
Stempak D., Dallas S., Klein J., Bendayan R., Koren G., Baruchel S. (2001) Ther. Drug Monit., 23, 542-549. CrossRef Scholar google search
Asensi M., Sastre J., Pallardo F.V., Garcia de la A.J., Estrela J.M., Vina J. (1994) Anal. Biochem., 217, 323-328. CrossRef Scholar google search
Melnyk S., Pogribna M., Pogribny I., Hine R.J., James S.J. (1999) J. Nutr. Biochem., 10, 490-497. CrossRef Scholar google search
Cereser C., Guichard J., Drai J., Bannier E., Garcia I., Boget S., Parvaz P., Revol A. (2001) J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl., 752, 123-132. CrossRef Scholar google search
Uhe A.M., Collier G.R., McLennan E.A., Tucker D.J., O`Dea K. (1991) J. Chromatogr., 564, 81-91. CrossRef Scholar google search
Palmio J., Huuhka M., Saransaari P., Oja S.S., Peltola J., Leinonen E., Suhonen J., Keranen T. (2005) Psychiatry Res., 137, 183-190. CrossRef Scholar google search
Dagilas A., Kimiskidis V., Aggelopoulou M., Kapaki E., Fitili C., Libitaki G., Papagiannopoulos S., Kazis D., Kazis A., Aidonis A. (2005) Otol. Neurotol., 26, 476-480. CrossRef Scholar google search
