Применение нового реагента Cu-FL для анализа стимуляции синтеза NO секретом слюнных клеток медицинской пиявки в культуре эндотелия человека (HUVEC) и кардиомиоцитов крысы
Впервые показана способность секрета слюнных клеток (ССК) медицинской пиявки продуцировать оксид азота в культуре эндотелия человека (HUVEC) и в кардиомиоцитах крысы (КМК) при непосредственном его определении с помощью нового NO-специфичного реагента - комплекса двухвалентной меди с производным флуоресцеина (Cu-FL). NO детектировали в клетках методом флуоресцентной микроскопии и определяли количественно в клетках и в культуральной жидкости методом флуоресценции. Стимулированная ССК интенсивность синтеза NO в клетках HUVEC, но не в КМК, такова, что оксид азота выходит в межклеточное пространство и это обеспечивает их дальнейшее распространение. Представлена локализация центров синтеза NO в клетках и показано, что увеличение количества NO при действии ССК на HUVEC и на КМК происходит в результате увеличения активности eNOS/nNOS, но не iNOS. В эндотелиальных клетках в присутствии ССК активируются процессы нитрозилирования, что проявляется в увеличении количества нитрит-ионов в среде культивирования по отношению к количеству NO. Поэтому важно, особенно в течение первого часа наблюдения за синтезом NO, использовать Cu-FL, но не реактив Грисса. NO-зависимый механизм действия ССК, возможно, является одним из факторов, обеспечивающих его положительное действие при гирудотерапии.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: оксид азота, секрет слюнных клеток медицинской пиявки, NO-зонд Cu-FL, флуоресцентная микроскопия, трансмиссионная электронная микроскопия, реактив Грисса, NO-синтазы
Цитирование:
Баскова И.П., Алексеева А.Ю., Костюк С.В., Неверова М.Е., Смирнова Т.Д., Вейко Н.Н. (2012) Применение нового реагента Cu-FL для анализа стимуляции синтеза NO секретом слюнных клеток медицинской пиявки в культуре эндотелия человека (HUVEC) и кардиомиоцитов крысы. Биомедицинская химия, 58(1), 65-76.
Баскова И.П. и др. Применение нового реагента Cu-FL для анализа стимуляции синтеза NO секретом слюнных клеток медицинской пиявки в культуре эндотелия человека (HUVEC) и кардиомиоцитов крысы // Биомедицинская химия. - 2012. - Т. 58. -N 1. - С. 65-76.
Баскова И.П. и др., "Применение нового реагента Cu-FL для анализа стимуляции синтеза NO секретом слюнных клеток медицинской пиявки в культуре эндотелия человека (HUVEC) и кардиомиоцитов крысы." Биомедицинская химия 58.1 (2012): 65-76.
Баскова, И. П., Алексеева, А. Ю., Костюк, С. В., Неверова, М. Е., Смирнова, Т. Д., Вейко, Н. Н. (2012). Применение нового реагента Cu-FL для анализа стимуляции синтеза NO секретом слюнных клеток медицинской пиявки в культуре эндотелия человека (HUVEC) и кардиомиоцитов крысы. Биомедицинская химия, 58(1), 65-76.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750813010022
Список литературы
Баскова И.П., Исаханян Г.С. (2004) Гирудотерапия. Наука и практика, Монолит, Москва. Scholar google search
Michalsen A., Roth M. (2006) Blutegeltherapie, Verlag, Stutgart. Scholar google search
McQuade L.E., Ma J., Lowe G., Ghatpande A., Gelperin A., Lippard S.J. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 8525-8530. CrossRef Scholar google search
Lim M.H., Wong B.A., Pitcock Jr. W.H., Mokshagundam D., Baik M.H., Lippard S.J. (2006) J. Am. Chem. Soc., 128, 14364-14373. CrossRef Scholar google search
Barouch L.A., Harrison R.W., Skaf M.W., Rosas G.O., Cappola T.P., Kobeissi Z.A., Hobai I.A., Lemmon C.A., Burnett A.L., O`Rourke B., Rodriguez E.R., Huang P.L., Lima J.A., Berkowitz D.E., Hare J.M. (2002) Nature, 416(6878), 337-339. CrossRef Scholar google search
McQuade L.E., Ma J., Lowe G., Ghatpande A., Gelperin A., Lippard S.J. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 8525-8530. CrossRef Scholar google search
Fulton D., Fontana J., Sowa G., Gratton J.P., Lin M., Li K.X., Michell B., Kemp B.E., Rodman D., Sessa W.C. (2002) J. Biol. Chem., 227, 4277-4284. CrossRef Scholar google search
Fulton D., Babbitt R., Zoellner S., Fontana J., Acevedo L., McCabe T.J., Iwakir Y., Sessa W.C. (2004) J. Biol. Chem., 279, 30349-30357. CrossRef Scholar google search
Garcia-Cardena G., Fan R., Stern D.F., Liu J., Sessa W.C. (1996) J. Biol. Chem., 271, 27237-27240. CrossRef Scholar google search
Garcia-Cardena G., Oh P., Liu J., Schnitzer J.E., Sessa W.C. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 6448-6453. CrossRef Scholar google search
Sessa W.C., Garcia-Cardena G., Liu J., Keh A., Pollock J.S., Bradley J., Thiru S., Braverman I.M., Desai K.M. (1995) J. Biol. Chem., 270, 17641-17644. CrossRef Scholar google search
Provost C., Choufani F., Avedanian L., Bkaily G., Gobeil F., Jacques D. (2010) Can. J. Physiol. Pharmacol., 88, 296-304. CrossRef Scholar google search
Gobeil F.Jr., Zhu T., Brault S., Geha A., Vazquez-Tello A., Fortier A., Barbaz D., Checchin D., Hou X., Nader M., Bkaily G., Gratton J.P., Heveker N., Ribeiro-da-Silva A., Peri K., Bard H., Chorvatova A., D`Orleans-Juste P., Goetzl E.J., Chemtob S. (2006) J. Biol. Chem., 281, 16058-16067. CrossRef Scholar google search
Drexler H., Kastner S., Strobel A., Studer R., Brodde O.E., Hasenfuss G. (1998) J. Am. Coll. Cardiol., 32, 955-963. CrossRef Scholar google search
Knuefermann P., Schwederski M., Velten M., Krings P., Ehrentraut H., Rudiger M., Boehm O., Fink K., Dreiner U., Grohe C., Hoeft A., Baumgarten G., Koch A., Zacharowski K., Meyer R. (2008) Cardiovasc. Res., 78(1), 26-35. CrossRef Scholar google search
Bulicheva N., Fidelina O., Mkrtumova N., Neverova M., Bogush A., Bogush M., Roginko O., Veiko N. (2008) Ann. N.-Y. Acad. Sci., 1137, 273-277. CrossRef Scholar google search
