Рекомбинантная синтетаза цефалоспоринов-кислот: оптимизация экспрессии в клетках E. coli, иммобилизация и использование для биокаталитического синтеза цефазолина

   
Эльдаров М.А.1 , Скляренко А.В.2 , Думина М.В.1, Медведева Н.В.2, Жгун А.А.1, Сатарова Д.Э.2, Сидоренко А.И.2, Епремян А.С.3, Яроцкий С.В.2

1. Центр “Биоинженерия” РАН, Москва, Россия
2. Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва, Россия
3. Научно-производственный центр “Армбиотехнология” Национальной академии наук Армении, Армения
Раздел: Краткие сообщения
DOI: 10.18097/PBMC20156105646      Идентификатор PubMed: 26539875
Год: 2015  том: 61  выпуск: 5  страницы: 646-651
Синтетаза цефалоспоринов-кислот (cephalosporin-acid synthetase, CASA) специфична к синтезу цефалоспоринов-кислот; продукция этого фермента в клетках Escherichia coli сопровождается накоплением непроцессированного нерастворимого предшественника. Для оптимизации условий продукции рекомбинантной CASA изучали эффекты таких параметров культивирования штамма-продуцента как состав питательной среды, посевная доза, температура культивирования. Для совершенствования вектора экспрессии CASA были созданы дополнительные конструкции для продукции варианта CASA с сигнальной последовательностью L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ansCASA) и “безлидерного” варианта CASA. Удаление N-концевой сигнальной последовательности на порядок снижало уровень продукции функционально активной CASA и подавляло рост штамма. Введение сигнальной последовательности L-аспарагиназы повышало удельную активность фермента в полученном штамме. С использованием продуцента ansCASA разработан метод иммобилизации рекомбинантного фермента на макропористом акрилатном носителе, содержащем активные эпоксигруппы. Полученный биокатализатор обеспечивал высокоэффективный синтеза цефазолина (ЦЕЗ) из 3-[(5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-тиометил]-7-аминоцефалоспорановой кислоты (ММТД-7-АЦК) и метилового эфира 1(H)-тетразолилуксусной кислоты (МЭТЗУК), в мягких условиях достигнута степень трансформации ММТД-7-АЦК в ЦЕЗ 95%.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: рекомбинантные ферменты, оптимизация экспрессии, синтетаза цефалоспоринов-кислот, антибиотики, цефазолин, биокаталитический синтез
Цитирование:

Эльдаров, М. А., Скляренко, А. В., Думина, М. В., Медведева, Н. В., Жгун, А. А., Сатарова, Д. Э., Сидоренко, А. И., Епремян, А. С., Яроцкий, С. В. (2015). Рекомбинантная синтетаза цефалоспоринов-кислот: оптимизация экспрессии в клетках E. coli, иммобилизация и использование для биокаталитического синтеза цефазолина. Биомедицинская химия, 61(5), 646-651.
Список литературы  
 2022 (том 68)
 2021 (том 67)
 2020 (том 66)
 2019 (том 65)
 2018 (том 64)
 2017 (том 63)
 2016 (том 62)
 2015 (том 61)
 2014 (том 60)
 2013 (том 59)
 2012 (том 58)
 2011 (том 57)
 2010 (том 56)
 2009 (том 55)
 2008 (том 54)
 2007 (том 53)
 2006 (том 52)
 2005 (том 51)
 2004 (том 50)
 2003 (том 49)