1. Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова НИЦ “Курчатовский институт”, Санкт-Петербург, Гатчина, Россия; ООО “Онко-система”, Москва, Сколково, Россия; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Петрова, Санкт-Петербург, Россия; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия 2. ООО “Онко-система”, Москва, Сколково, Россия; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Петрова, Санкт-Петербург, Россия 3. Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова НИЦ “Курчатовский институт”, Санкт-Петербург, Гатчина, Россия 4. НИЦ “Курчатовский институт”, Москва, Россия 5. Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия 6. Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова НИЦ “Курчатовский институт”, Санкт-Петербург, Гатчина, Россия; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
Внеклеточные микровезикулы (ВМВ) секретируются клетками многоклеточных организмов и обеспечивают “горизонтальный” межклеточный перенос веществ и информации. Этот феномен имеет важное биологическое значение и привлекает внимание тысяч исследователей. Большая часть исследований проводится в условиях in vitro экспериментов, позволяющих анализировать биогенез, структурные и функциональные особенности ВМВ. В лабораторной практике существует несколько методов выделения ВМВ из культуральной среды, причём выбор метода влияет на получаемые результаты. Оптимальный метод обычно определяется объёмом исследуемого материала и задачами исследования. В рамках данной работы проведен сравнительный анализ четырёх методов выделения ВМВ из культуральной среды: последовательное ультрацентрифугирование, ультрацентрифугирование с использованием “подушки” сахарозы, агглютинация ВМВ лектинами растительного происхождения и иммунопреципитация на латексных частицах. В исследовании был использован ряд глиальных клеточных линий человека. Проведена сравнительная оценка препаратов ВМВ, выделенных разными методами, по ряду параметров: размер, концентрация, морфология ВМВ, наличие примесей невезикулярной природы, содержание в мембране ВМВ экзосомальных тетраспанинов, содержание белка, тотальной РНК, и нескольких микроРНК, ассоциированных с развитием глиом. Использованы методы: анализ траекторий наночастиц, лазерная корреляционная спектроскопия, криоэлектронная микроскопия, проточная цитометрия, ОТ-ПЦР. По результатам работы сформулированы практические рекомендации относительно выбора оптимального метода с учетом возможных задач исследования.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: внеклеточные микровезикулы, экзосомы, методы выделения, ультрацентрифугирование, лектины, иммунопреципитация
Цитирование:
Штам Т.А., Самсонов Р.Б., Волницкий А.В., Камышинский Р.А., Верлов Н.А., Князева М.С., Коробкина Е.А., Орехов А.С., Васильев А.Л., Коневега А.Л., Малек А.В. (2018) Сравнительный анализ методов выделения внеклеточных микровезикул из культуральной среды. Биомедицинская химия, 64(1), 23-30.
Штам Т.А. и др. Сравнительный анализ методов выделения внеклеточных микровезикул из культуральной среды // Биомедицинская химия. - 2018. - Т. 64. -N 1. - С. 23-30.
Штам Т.А. и др., "Сравнительный анализ методов выделения внеклеточных микровезикул из культуральной среды." Биомедицинская химия 64.1 (2018): 23-30.
Штам, Т. А., Самсонов, Р. Б., Волницкий, А. В., Камышинский, Р. А., Верлов, Н. А., Князева, М. С., Коробкина, Е. А., Орехов, А. С., Васильев, А. Л., Коневега, А. Л., Малек, А. В. (2018). Сравнительный анализ методов выделения внеклеточных микровезикул из культуральной среды. Биомедицинская химия, 64(1), 23-30.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750818020117
Список литературы
Rothman J.E., Schekman R.W., Südhof T.C. (2013) The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2013, Press Release. Scholar google search
Lener T., Gimona M., Aigner L., Borger V., Buzas E., Camussi G., Chaput N., Chatterjee D., Court F.A. et al. (2015) J. Extracellular Vesicles, 4, 30087. CrossRef Scholar google search
Willms E., Johansson H.J., Mager I., Lee Y., Blomberg K.E., Sadik M., Alaarg A., Smith C.I., Lehtio J., El Andaloussi S., Wood M.J., Vader P. (2016) Sci. Rep., 6, 22519. CrossRef Scholar google search
Zabeo D., Cvjetkovic A., Lasser C., Schorb M., Lotvall J., Hoog J.L. (2016) bioRxiv. Scholar google search
Smith Z.J., Lee C., Rojalin T., Carney R.P., Hazari S., Knudson A., Lam K., Saari H., Ibanez E.L., Viitala T., Laaksonen T., Yliperttula M., Wachsmann-Hogiu S. (2015) J. Extracellular Vesicles, 4, 28533. CrossRef Scholar google search
Lotvall J., Hill A.F., Hochberg F., Buzas E.I., Di Vizio D., Gardiner C., Gho Y.S., Kurochkin I.V., Mathivanan S., Quesenberry P., Sahoo S., Tahara H., Wauben M.H., Witwer K.W., Thery C. (2014) J. Extracellular Vesicles, 3, 26913. Scholar google search
Gardiner C., Di Vizio D., Sahoo S., Thery C., Witwer K.W., Wauben M., Hill A.F. (2016) J. Extracellular Vesicles, 5, 32945. CrossRef Scholar google search
Samsonov R., Burdakov V., Shtam T., Radzhabova C.Z., Vasilyev D., Tsyrlina E., Titov S., Ivanov M., Berstein L., Filatov M., Kolesnikov N., Gil-Henn H., Malek A. (2016) Tumour Biology, 37, 12011-12021. CrossRef Scholar google search
Samsonov R., Shtam T., Burdakov V., Glotov A., Tsyrlina E., Berstein L., Nosov A., Evtushenko V., Filatov M., Malek A. (2016) The Prostate, 76, 68-79. CrossRef Scholar google search
Shtam T., Samsonov R., Kamyshinsky R., Pantina R., Verlov N., Vasiliev A., Konevega A.L., Malek A.V. (2017) AIP Conference Proceedings, 1882, 020066; doi:10.1063/1.5001645. CrossRef Scholar google search
Zhou D., Wan Y., Xie D., Wang Y., Wei J., Yan Q., Lu P., Mo L., Xie J., Yang S., Qi X. (2015) Exper. Molec. Med., 47, 182. CrossRef Scholar google search
Wei J., Qi X., Zhan Q., Zhou D., Yan Q., Wang Y., Mo L., Wan Y., Xie D., Xie J., Yang S. (2015) Biomed. Pharmacother., 71, 112-118. CrossRef Scholar google search
