1. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия 2. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия; Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия 3. Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия; Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия 4. Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины, Москва, Россия; Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия
Проведено сравнительное исследование ферментативной и бактерицидной активности зрелой, димерной миелопероксидазы (МПО) и её мономерной формы. Димерную МПО выделяли из клеток линии HL-60. В качестве мономерной формы использовали геми-МПО, которую получали из димерной МПО восстановлением дисульфидной связи, соединяющей протомеры в димер. Оценивали оба вида ферментативной активности, свойственных МПО (пероксидазную и галогенирующую), каждую из которых измеряли двумя методами. Бактерицидную активность системы МПО/Н2О2/Cl- тестировали, используя лабораторный штамм Escherichia coli DH5a. Не было выявлено разницы в ферментативной и бактерицидной активности между димерной МПО и геми-МПО. Обе формы фермента не отличались между собой и по устойчивости к HOCl – основному продукту катализируемых МПО реакций. HOCl вызывала дозо-зависимое уменьшение пероксидазной и хлорирующей активности, и это уменьшение происходило одинаковым образом в образцах димерной МПО и геми-МПО. При концентрации димерной МПО и геми-МПО, уравненной по гему, отмечен несколько больший бактерицидный эффект в случае системы геми-МПО/Н2О2/Cl- по сравнению с системой димерная МПО/Н2О2/Cl-. Это, скорее всего, обусловлено увеличением вероятности контакта фермента с поверхностью бактерий благодаря тому, что при равной концентрации по гему количество молекул геми-МПО в два раза больше количества молекул димерной МПО. Методом Вестерн-блоттинга с использованием антител против МПО впервые показано, что HOCl вызывает расщепление димерной молекулы на мономерные субъединицы, по-видимому, в результате окисления дисульфидной связи между ними. Это позволяет предположить, что появление в крови МПО, соответствующей по массе мономеру, связано с повреждением димерной МПО активными формами галогенов, особенно при их избыточной продукции, создающей окислительный/галогенирующий стресс при воспалительных заболеваниях.
Вахрушева Т.В., Соколов А.В., Костевич В.А., Васильев В.Б., Панасенко О.М. (2018) Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы. Биомедицинская химия, 64(2), 175-182.
Вахрушева Т.В. и др. Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы // Биомедицинская химия. - 2018. - Т. 64. -N 2. - С. 175-182.
Вахрушева Т.В. и др., "Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы." Биомедицинская химия 64.2 (2018): 175-182.
Вахрушева, Т. В., Соколов, А. В., Костевич, В. А., Васильев, В. Б., Панасенко, О. М. (2018). Ферментативная и бактерицидная активность мономерной и димерной форм миелопероксидазы. Биомедицинская химия, 64(2), 175-182.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750818030083
Список литературы
Johnson K.R., Nauseef W.M., Care A., Wheelock M.J., Shane S., Hudson S., Koeffler H.P., Selsted M., Miller C., Rovera G. (1987) Nucleic Acids Res., 15(5), 2013-2028. CrossRef Scholar google search
Gullberg U., Bengtsson N., Bulow E., Garwicz D., Lindmark A., Olsson I. (1999) J. Immunol. Methods, 232(1-2), 201-210. CrossRef Scholar google search
Панасенко О.М., Вахрушева Т.В., Григорьева Д.В., Горудко И.В., Соколов А.В., Костевич В.А., Черенкевич С.Н. (2015) Модификация миелопероксидазы в условиях, моделирующих окислительный/галогенирующий стресс. В сб. “Свободные радикалы в химии и жизни”. Сборник тезисов докладов Международной конф. Минск, 25-26 июня, 2015 г. Изд. центр БГУ. Минск, 27-28. ISBN: 978-985-553-292-8. Scholar google search
Maitra D., Shaeib F., Abdulhamid I., Abdulridha R.V., Saed G.M., Diamond M.P., Pennathur S., Abu-Soud H.M. (2013) Free Radic. Biol. Med., 63, 90-98. CrossRef Scholar google search
