Экзосомы – мембранные микровезикулы, выделяемые клетками в биологические жидкости. Мембрана экзосом защищает их содержимое от деградации и содержит маркеры продуцирующей их клетки. Экзосомы продуцируются практически всеми клетками организма, клетки опухолей секретируют их особенно сильно. Однако, при исследовании функций этих внеклеточных везикул и идентификации опухолевых белковых биомаркеров в их составе на начальном этапе возникает серьезная проблема выделения чистых, охарактеризованных препаратов экзосом. В данной работе проведен количественный протеомный анализ экзосом сыворотки крови человека, полученных при помощи дифференциального ультрацентрифугирования, ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы или осаждения экзосомальной фракции сыворотки с использованием коммерческого набора Exosome Isolation Kit (“Invitrogen from ThermoFisher Scientific Baltics”, UAB, Литва). Масс-спектрометрическими методами мониторинга выбранных реакций (SRM) и панорамного масс-спектрометрического анализа проведено определение белкового состава выделенных экзосом. Полученные препараты были охарактеризованы по содержанию основных маркеров (CD9, CD82, HSPA8, CD63). В образцах экзосом, выделенных из сыворотки здоровых добровольцев методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы, было определено содержание вышеуказанных маркеров, которое составило 32,85, 15,59, 6,07 фмоль на 1мкг белка препарата экзосом, соответственно. Остальные методы, включая коммерческий набор, не дали положительных результатов. Результаты этого исследования показывают, что метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы является наиболее оптимальным для выделения экзосом.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: экзосомы, биомаркеры, методы выделения, ультрацентрифугирование, масс-спектрометрия
Дополнительные материалы:
Цитирование:
Шушкова Н.А., Вавилов Н.Э., Новикова С.Е., Фарафонова Т.Е., Тихонова О.В., Лияо Пао-чи, Згода В.Г. (2018) Количественный протеомный анализ экзосом крови человека. Биомедицинская химия, 64(6), 496-504.
Шушкова Н.А. и др. Количественный протеомный анализ экзосом крови человека // Биомедицинская химия. - 2018. - Т. 64. -N 6. - С. 496-504.
Шушкова Н.А. и др., "Количественный протеомный анализ экзосом крови человека." Биомедицинская химия 64.6 (2018): 496-504.
Шушкова, Н. А., Вавилов, Н. Э., Новикова, С. Е., Фарафонова, Т. Е., Тихонова, О. В., Лияо, Пао-чи,, Згода, В. Г. (2018). Количественный протеомный анализ экзосом крови человека. Биомедицинская химия, 64(6), 496-504.
Переводная версия в журнале «Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»:10.1134/S1990750819020094
Список литературы
Popesko B., Novák P., Papadaki S., Hrabec D. (2015) Transformations in Business and Economics, 14, 373-388. Scholar google search
Logozzi M., De Milito A., Lugini L., Borghi M., Calabrò L., Spada M., Perdicchio M., Marino M.L., Federici C., Iessi E., Brambilla D., Venturi G., Lozupone F., Santinami M., Huber V., Maio M., Rivoltini L., Fais S. (2009) PLoS ONE, 4, e5219. CrossRef Scholar google search
Rolfo C., Castiglia M., Hong D., Alessandro R., Mertens I., Baggerman G., Zwaenepoel K., Gil-Bazo I., Passiglia F., Carreca A.P., Taverna S., Vento R., Santini D., Peeters M., Russo A., Pauwels P. (2014) Biochim. Biophys. Acta, 1846, 539-546. CrossRef Scholar google search
Carretero-González A., Otero I., Carril-Ajuria L., de Velasco G., Manso L. (2018) Cancer Microenviron., 11, 13-21. CrossRef Scholar google search
Pultz D.A.B., Cordero da Luz A.F., Faria S.S., Ferreira de Souza P.F,L., Tavares C.B.P., Goulart A.V., Fontes W., Goulart R.L., Barbosa Silva J.M. (2017) Int. J. Cancer, 140, 2397-2407. CrossRef Scholar google search
https://www.invitrogen.com, InvitrogenTM. (2012) User Guide: Total Exosome Isolation (from serum), (June). Scholar google search
Hood C.A., Fuentes G., Patel H., Page K., Menakuru M., Park J.H. (2008) J. Pept. Sci., 14, 97-101. CrossRef Scholar google search
Lenassi M., Cagney G., Liao M., Vaupotic T., Bartholomeeusen K., Cheng Y., Krogan N.J., Plemenitas A., Peterlin B.M. (2010) Traffic, 11, 110-122. CrossRef Scholar google search
Bobrie A., Colombo M., Krumeich S., Raposo G., Théry C. (2012) J. Extracell Vesicles, 1, 1-11. CrossRef Scholar google search
Caradec J., Kharmate G., Hosseini-Beheshti E., Adomat H., Gleave M., Guns E. (2014) Clin. Biochem., 47, 1286-1292. CrossRef Scholar google search
Helwa I., Cai J., Drewry M.D., Zimmerman A., Dinkins M.B., Khaled M.L., Seremwe M., Dismuke W.M., Bieberich E., Stamer W.D., Hamrick M.W., Liu Y. (2017) PLoS One, 12, e0170628. CrossRef Scholar google search
Ioachim E., Michael M.C., Salmas M., Damala K., Tsanou E., Michael M.M., Malamou-Mitsi V., Stavropoulos N.E. (2006) BMC Cancer, 6, 140. CrossRef Scholar google search
