Исследовали взаимодействие антиреналазных антител с полноразмерными рекомбинантными реналазами человека RNLS1 и RNLS2, а также фрагментами этих белков, кодируемыми альтернативными экзонами 9 и 10 и экспрессированными в виде слитых (fusion) с дигидрофолатредуктазой (DHFR) белков в клетках Escherichia coli. В работе использовали созданные по нашему запросу поликлональные антитела к полноразмерной рекомбинантной RNLS1 (аминокислотные остатки (а.о.) 1–342), а также коммерчески доступные моноклональные антитела к фрагменту реналазы (а.о. — 18–342), специфичному для изоформы RNLS1. По данным Вестерн-блот анализа, антитела взаимодействовали не только с препаратами рекомбинантных RNLS1 и RNLS2, но и со слитыми (фьюжен) белками, содержащими C-концевые последовательности, специфичные для этих изоформ (DHFR-RNLS-9ex и DHFR-RNLS-10ex). Полученные результаты свидетельствуют о том, что исследованные антитела помимо своих непосредственных мишеней “узнавали” и другие белковые конструкции RNLS1 и RNLS2, отсутствующие в иммуногенах, использованных для выработки антител.
Загрузить PDF:
Ключевые слова: поликлональные и моноклональные антиреналазные антитела, реналаза-1 человека (RNLS1), реналаза-2 человека (RNLS2), C-концевые области, кодируемые альтернативными экзонами, фьюжен белки DHFR-RNLS-9ex и DHFR-RNLS-10ex
Цитирование:
Федченко В.И., Калошин А.А., Калошина С.А., Бунеева О.А., Копылов А.Т., Медведев А.Е. (2025) Взаимодействие антиреналазных антител с рекомбинантными реналазами человека 1 и 2 и их C-концевыми областями, кодируемыми альтернативными экзонами. Биомедицинская химия, 71(4), 283-287.
Федченко В.И. и др. Взаимодействие антиреналазных антител с рекомбинантными реналазами человека 1 и 2 и их C-концевыми областями, кодируемыми альтернативными экзонами // Биомедицинская химия. - 2025. - Т. 71. -N 4. - С. 283-287.
Федченко В.И. и др., "Взаимодействие антиреналазных антител с рекомбинантными реналазами человека 1 и 2 и их C-концевыми областями, кодируемыми альтернативными экзонами." Биомедицинская химия 71.4 (2025): 283-287.
Федченко, В. И., Калошин, А. А., Калошина, С. А., Бунеева, О. А., Копылов, А. Т., Медведев, А. Е. (2025). Взаимодействие антиреналазных антител с рекомбинантными реналазами человека 1 и 2 и их C-концевыми областями, кодируемыми альтернативными экзонами. Биомедицинская химия, 71(4), 283-287.
Список литературы
Xu J., Li G., Wang P., Velazquez H., Yao X., Li Y., Wu Y., Peixoto A., Crowley S., Desir G.V. (2005) Renalase is a novel, soluble monoamine oxidase that regulates cardiac function and blood pressure. J. Clin. Invest., 115(5), 1275–1280. CrossRef Scholar google search
Wang Y., Safirstein R., Velazquez H., Guo X.-J., Hollander L., Chang J., Chen T.-M., Mu J.-J., Desir G.V. (2017) Extracellular renalase protects cells and organs by outside-in signalling. J. Cell. Mol. Med., 21(7), 1260–1265. CrossRef Scholar google search
Kolodecik T.R., Reed A.M., Date K., Shugrue C.A., Patel V., Chung S.-L., Desir G.V., Gorelick F.S. (2017) The serum protein renalase reduces injury in experimental pancreatitis. J. Biol. Chem., 292(51), 21047–21059. CrossRef Scholar google search
Guo X., Wang L., Velazquez H., Safirstein R., Desir G.V. (2014) Renalase: its role as a cytokine, and an update on its association with type 1 diabetes and ischemic stroke. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens., 23(5), 513–518. CrossRef Scholar google search
Baroni S., Milani M., Pandini V., Pavesi G., Horner D., Aliverti A. (2013) Is renalase a novel player in catecholaminergic signaling? The mystery of the catalytic activity of an intriguing new flavoenzyme. Curr. Pharm. Des., 19(14), 2540–2551. CrossRef Scholar google search
Serwin N.M., Wiśniewska M., Cecerska-Heryć E., Safranow S., Skwirczyńska E., Dołęgowska B. (2020) Serum-to-urine renalase ratio and renalase fractional excretion in healthy adults and chronic kidney disease patients. BMC Nephrology, 21(1), 77. CrossRef Scholar google search
Zhang L., Zang C.-S., Chen B., Wang Y., Xue S., Wu M.-Y. (2023) Renalase regulates renal tubular injury in diabetic nephropathy via the p38MAPK signaling pathway. FASEB J., 37(10), e23188. CrossRef Scholar google search
Wang F., Wang N.-S., Xing T., Cao Y., Xiang H.-Y. (2009) The cloning and expression of renalase and the preparation of its monoclonal antibody. J. Shanghai Jiaotong Univ. (Sci.), 14(3), 376–379. CrossRef Scholar google search
Федченко В.И., Калошин А.A., Веселовский A.В., Медведев A.Е. (2022) Конструирование и экспрессия химерного гена реналазы человека, кодирующего N-концевую сигнальную последовательность секреторного белка пролактина. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 5(2), e00175. CrossRef Scholar google search
National Center for Biotechnology Information. Retrieved July 11, 2025 from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ sites/entrez?db=gene&cmd=Retrieve&dopt=full_report& list_uids=55328. Scholar google search
Hennebry S.C., Eikelis N., Socratous F., Desir G., Lambert G., Schlaich M. (2010) Renalase, a novel soluble FAD-dependent protein, is synthesized in the brain and peripheral nerves. Mol. Psychiatry, 15(3), 234–236. CrossRef Scholar google search
Fedchenko V.I., Kaloshin A.A., Mezhevikina L.M., Buneeva O.A., Medvedev A.E. (2013) Construction of the coding sequence of the transcription variant 2 of the human Renalase gene and its expression in the prokaryotic system. Int. J. Mol. Sci., 14(6), 12764–1279. CrossRef Scholar google search
Fedchenko V.I., Veselovsky A.V., Kopylov A.T., Kaloshina S.A., Medvedev A.E. (2022) Renalase may be cleaved in blood. Are blood chymotrypsin-like enzymes involved? Medical Hypotheses, 165, 110895. CrossRef Scholar google search
Serban-Feier L.F., Cuiban E., Gogosoiu E.B., Stepan E., Radulescu D. (2024) Renalase potential as a marker and therapeutic target in chronic kidney disease. Biomedicines, 12(8), 1715. CrossRef Scholar google search
Lee I-T., Sheu W.H.-H. (2018) Serum renalase levels are predicted by brain-derived neurotrophic factor and associated with cardiovascular events and mortality after percutaneous coronary intervention. J. Clin. Med., 7(11), 437. CrossRef Scholar google search
Kopylov A.T., Fedchenko V.I., Buneeva O.A., Pyatakova N.V., Zgoda V.G., Medvedev A.E. (2018) A new method for quantitative determination of renalase based on mass spectrometric determination of a proteotypic peptide labelled with stable isotopes. Rapid Commun. Mass Spectrom., 32(15), 1263–1270. CrossRef Scholar google search
Thermo Fischer Scientific. Retrieved April 1, 2025 from: https://www.thermofisher.com/antibody/primary/target/ renalase/filter/antigenspecies/Human/uniprot/Q5VYX0-1 ?activeTab=antigens. Scholar google search
Федченко В.И., Калошин А.А., Калошина С.А., Медведев А.Е. (2024) Взаимодействие поликлональных антител мыши и овцы с основными формами реналазы человека и крысы. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 7(4), e00248. CrossRef Scholar google search
Федченко В.И., Калошин А.А., Медведев А.Е. (2024) Получение C-концевых последовательностей реналазы-1 и реналазы-2 человека, кодируемых альтернативными экзонами. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 7(2), e00228. CrossRef Scholar google search
Федченко В.И., Калошин А.A. (2019) Упрощенный метод получения кДНК низкокопийных и молчащих эукариотических генов на примере реналазы человека. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 2(2), e00101. CrossRef Scholar google search
Федченко В.И., Калошин А.А., Калошина С.А., Медведев А.Е. (2021) Особенности экспрессии и выделения укороченной рекомбинантной реналазы в прокариотических клетках. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 4(3), e00158. CrossRef Scholar google search
Laemmli U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227(5259), 680–685. CrossRef Scholar google search
Gallagher S., Winston S.E., Fuller S.A., Hurrell J.G. (2008) Immunoblotting and immunodetection. Curr. Protoc. Mol. Biol., Chapter 10: Unit 10.8. CrossRef Scholar google search
Северина И.С., Федченко В.И., Веселовский А.В., Медведев А.Е. (2015) История реналазы от аминоксидазы до α-NAD(P)H-оксидазы/аномеразы. Биомедицинская химия, 61(6), 667–679. CrossRef Scholar google search
Pointer T.C., Gorelick F.S., Desir G.V. (2021) Renalase: a multi-functional signaling molecule with roles in gastrointestinal disease. Cells, 10(8), 2006. CrossRef Scholar google search
Baek S.H., Cha R.-H., Kang S.W., Park C.W., Cha D.R., Kim S.G., Yoon S.A., Kim S., Han S.-Y., Park J.H., Chang J.H., Lim C.S., Kim Y.S., Na K.Y. (2019) Circulating renalase predicts all-cause mortality and renal outcomes in patients with advanced chronic kidney disease. Korean J. Intern. Med., 34(4), 858–866. CrossRef Scholar google search
Knop W., Serwin N.M., Cecerska-Heryć E., Grygorcewicz B., Dołęgowska B., Gomółka A., Wiśniewska M., Ciechanowski K. (2021) Elevated levels of renalase, the β-NAD(P)H isomerase, can be used as risk factors of major adverse cardiovascular events and all-cause death in patients with chronic kidney disease. Biomolecules, 11(10), 1514. CrossRef Scholar google search
