Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов

   
Шевчук Н.А.1 , Манила Дж.2, Нусинович Е.А.1, Ладиш С.1

1. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии Программа по молекулярной и клеточной онкологии, Институт биомедицинских наук, Университет Джорджа Вашингтона
2. Центр онкологических и иммунологических исследований, Научно-исследовательский институт педиатрии корпорация Human Genome Sciences
Раздел: Экспериментальные/клинические исследование
Идентификатор PubMed: 16898583
Год: 2006  том: 52  выпуск: 3  страницы: 245-257
Клеточные ганглиозиды участвуют во взаимодействиях между раковой опухолью и иммунной системой пациента. Для исследования их роли в формировании опухоли и ангиогенезе, мы разработали модель, основанную на антисмысловом ингибировании GM3-синтазы, одного из базовых ферментов в биосинтезе ганглиозидов. Получен ряд трансфицированных клонов клеточной линии DAOY (медуллобластомы человека), из которых выделены несколько клонов, которые стабильно экспрессировали 560-нуклеотидный фрагмент кДНК GM3-синтазы в смысловой или антисмысловой ориентации, а также клонов, трасфицированных пустым вектором. Все клеточные клоны перманентно интегрировали экспрессионные вектора в свою геномную ДНК. Полученные клоны были проанализированы на содержание ганглиозидов при помощи экстракции клеточных липидов, выделения ганглиозидов и применения высоко эффективной тонкослойной хроматографии. У одного из антисмысловых клонов, названного 7.2А, уровень ганглиозидов был снижен на 70%. Во всех контрольных клонах (трансфицированных смысловым и "пустым" векторами) содержание ганглиозидов не отличалось от нетрансфицированных клеток DAOY. Тем не менее, после 10-ти пассажей в культуре, уровень ганглиозидов у клона 7.2А возвращался к норме, несмотря на неизменно высокий уровень экспрессии антисмысловой мРНК. Следовательно, трансфекция клеток антисмысловой РНК может иногда вызывать только временное ингибирование экспрессии продукта-мишени.
Загрузить PDF:  
Ключевые слова: ганглиозиды, GM3 синтаза, антисмысловая мРНК, трансфекция, медуллобластома
Цитирование:

Шевчук, Н. А., Манила, Дж., Нусинович, Е. А., Ладиш, С. (2006). Стабильная трансфекция клеток DAOY антисмысловым вектором против GM3 синтазы и временное уменьшение уровня ганглиозидов. Биомедицинская химия, 52(3), 245-257.
Переводная версия в журнале
«Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»: 10.1134/S1990750807010106
Список литературы