Микробный синтез 2 H-меченного L-фенилаланина разного уровня дейтерированности факультативной метилотрофной бактерией brevibacterium methylicum c РМФ-циклом ассимиляции углерода

   
Мосин О.В.1 , Швец В.И.1, Складнев Д.А.2, Игнатов И.3

1. Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова
2. Научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов
3. Научно-исследовательский центр медицинской биофизики
Раздел: Экспериментальные исследования
DOI: 10.18097/PBMC20146004448      Идентификатор PubMed: 25249528
Год: 2014  том: 60  выпуск: 4  страницы: 448-461
На примере L-фенилаланинсекретирующего штамма аэробных грамотрицательных факультативных метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum, ассимилирующих метанол по рибулозо-5-монофосфатному (РМФ) циклу ассимиляции углерода, продолжены исследования по биотехнологическому использованию метилотрофных бактерий для препаративного микробного синтеза аминокислот для биомедицинской диагностики, меченных стабильными изотопами, в том числе дейтерием ( 2 Н). Представлены данные по адаптации штамма В. methylicum к максимальной концентрации дейтерия в среде культивирования с 98% 2 Н 2 O и 2% [ 2 Н]метанолом и биосинтезу дейтерий-меченного L-фенилаланина разного уровня дейтерированности. Исходный штамм адаптирован к 2 Н 2 O посредством рассева клеток на твердые (2% агар) минимальные среды с увеличивающимся градиентом концентрации 2 Н 2 O: от 0; 24,5; 49,0; 73,5 до 98% 2 Н 2 O и последующей селекции отдельных устойчивых к 2 Н 2 O колоний клеток, способных продуцировать L-фенилаланин. L-фенилаланин был выделен из культуральной жидкости экстракцией изопропанолом с последующей перекристаллизацией в этаноле (выход 0,65 г/л). Разработанный метод микробного синтеза позволяет получать дейтерий-меченный L-фенилаланин разного уровня дейтерированности в зависимости от концентрации 2 Н 2 O в ростовой среде: от 17% (на среде с 24,5% 2 Н 2 O) до 75% (на среде с 98% 2 Н 2 O) дейтерия в молекуле, что подтверждено данными масс-спектрометрического анализа электронного удара (ЭУ) метиловых эфиров N-(диметиламино)нафтален-1-сульфонил хлоридных (дансильных) производных фенилаланина, выделенных из культуральной жидкости штамма-продуцента в различных экспериментальных условиях.
Загрузить PDF:  
Ключевые слова: Brevibacterium methylicum, L-фенилаланин, биосинтез, тяжёлая вода, масс-спектрометрия ЭУ
Цитирование:

Мосин, О. В., Швец, В. И., Складнев, Д. А., Игнатов, И. (2014). Микробный синтез 2 H-меченного L-фенилаланина разного уровня дейтерированности факультативной метилотрофной бактерией brevibacterium methylicum c РМФ-циклом ассимиляции углерода. Биомедицинская химия, 60(4), 448-461.
Переводная версия в журнале
«Biomedical Chemistry (Moscow) Supplement Series B»: 10.1134/S1990750813030098
Список литературы